Ames試驗(yàn)的類型

Ames試驗(yàn)是由由美國(guó)加利福利亞大學(xué)伯克利分校生化系B.N.Ames教授實(shí)驗(yàn)室在1975年建立的鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，從建立到后來(lái)的不斷完善，現(xiàn)在Ames試驗(yàn)被廣泛應(yīng)用于化合物的致突變性和潛在致癌性的初篩檢驗(yàn)。為了對(duì)Ames試驗(yàn)有更多的了解，特收集整理了網(wǎng)上的資料，對(duì)Ames試驗(yàn)的類型進(jìn)行了盤點(diǎn)。

Ames試驗(yàn)是利用鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸 (histidine)營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株發(fā)生回復(fù)突變的性質(zhì)，對(duì)化學(xué)物質(zhì)致突變性進(jìn)行初步篩選的短期體外試驗(yàn)方法。在GLP試驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)，而在藥物篩選早期常用的試驗(yàn)有Mini-Ames試驗(yàn)、Micro-Ames試驗(yàn)、AmesII試驗(yàn)等，特點(diǎn)是用藥量少�？蓹z測(cè)基因突變的Ames試驗(yàn)與檢測(cè)DNA損傷的體外彗星試驗(yàn)，考察染色體異常的體外微核試驗(yàn)等結(jié)合在一起，評(píng)價(jià)化合物的體外遺傳毒性，探討毒性作用機(jī)制，為該化合物毒性的防治提供理論依據(jù)。美迪西建立了符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的藥物安全評(píng)價(jià)體系，實(shí)驗(yàn)研究遵循ICH、CFDA、FDA和OECD指導(dǎo)原則，可為客戶提供高質(zhì)量的數(shù)據(jù)、快速的研究周期的臨床前藥物安全性評(píng)價(jià)服務(wù)。

1、Mini-Ames試驗(yàn)

通過(guò)收集整理網(wǎng)上的資料得到了Mini-Ames試驗(yàn)的一些資料。Mini-Ames試驗(yàn)即微型的Ames試驗(yàn)，試驗(yàn)方法同標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)相同，可以用于藥物的早期開(kāi)發(fā)和篩選，是一種對(duì)于藥物的遺傳毒理的檢測(cè)比較可靠的方法。與標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)的100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿相比，Mini-Ames試驗(yàn)用六孔細(xì)胞培養(yǎng)板板替代平皿。Mini-Ames試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)為一周，周期短，供試品需求量和試劑耗材少，用量約為Ames試驗(yàn)的20%。而且Mini-Ames試驗(yàn)篩選效率高，可以在同一實(shí)驗(yàn)方案中同時(shí)篩選多個(gè)供試品。

2、Micro-Ames試驗(yàn)

Mini Ames試驗(yàn)或者M(jìn)icro Ames試驗(yàn)通常選擇2個(gè)菌株（即TA98和TA100，可檢測(cè)98%致突變劑），為了消除另外2%的可能性，可選擇與標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)相同的5個(gè)菌株。

3、AmesII試驗(yàn)

AmesII試驗(yàn)又稱為Ames波動(dòng)試驗(yàn)，由Gee等通過(guò)開(kāi)發(fā)新的菌株，并改進(jìn)傳統(tǒng)Ames試驗(yàn)方法，開(kāi)發(fā)出的新的Ames試驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)方法上，AmesII試驗(yàn)采用了液態(tài)微孔板培養(yǎng)方法，摒棄了試驗(yàn)所用的固態(tài)瓊脂平板培養(yǎng)方法。即在微孔板中進(jìn)行受試物和菌株的孵育，利用培養(yǎng)基中的特殊指示劑溴甲酚紫，當(dāng)孔中有回復(fù)突變的菌株生長(zhǎng)，使培養(yǎng)基pH值降低時(shí)，該指示劑由紫色變?yōu)辄S色。利用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，可記錄培養(yǎng)基為黃色孔的數(shù)量，也即反應(yīng)出受試物的致突變性。全過(guò)程可以全自動(dòng)由機(jī)器完成，真正實(shí)現(xiàn)了高通量化。

AmesII試驗(yàn)使用菌株TA98和混合菌株TA7001至7006，將細(xì)菌與受試物預(yù)培養(yǎng)及一系列稀釋后，在30℃培養(yǎng)過(guò)夜，然后接種到各有選擇性試劑5-FU及pH敏感劑溴甲酚紫的384孔上，通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)培養(yǎng)基變黃的程度來(lái)判斷受試物致突變性。

不同類型的Ames試驗(yàn)其優(yōu)缺點(diǎn)不同，可能需要改進(jìn)和完善的還有很多。但隨著科學(xué)技術(shù)尤其是分子生物學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展，遺傳毒性早期快速評(píng)價(jià)方法也在不斷發(fā)展和完善中，為藥物研發(fā)提供了很多的助力。