如何清潔移液器以減少移液污染造成的PCR檢測假陽性風(fēng)險

對于大量進(jìn)行PCR的實驗室來說，移液器的污染造成的假陽性并不是一個罕見的情況。

 

PCR尤其是RT-PCR技術(shù)已經(jīng)逐漸成為疾病診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法。如近期流行的新冠（COVID-19）疫情，RT-PCR結(jié)果即為診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。對于PCR檢測，由于實驗室設(shè)備的污染造成的假陽性結(jié)果也不容忽視。尤其是在樣本量極大，PCR儀連續(xù)工作期間，檢測間往往都是封閉環(huán)境，氣溶膠彌漫，儀器極易污染。而移液器往往是離樣品最近，使用最頻繁的儀器，不論是吸液過程中，還是在操作環(huán)境中，都非常容易被污染。污染的移液器可能會將污染的樣品或核酸引入后續(xù)樣品或者PCR反應(yīng)體系中導(dǎo)致檢出信號而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

 

我們以德國BRAND 的Transferpette® S移液器為例，介紹如何清潔移液器以減少移液器污染造成的假陽性風(fēng)險。德國BRAND 的Transferpette® S移液器具有易于拆卸維護(hù)的優(yōu)點，配件更換容易，并具有易校準(zhǔn)技術(shù)，無需工具即可進(jìn)行移液器校準(zhǔn)。并且Transferpette® S移液器可以整支121 oC高壓滅菌，尤其適合用于PCR實驗。

 

 

移液器污染容易造成PCR實驗假陽性風(fēng)險的部分主要為下半支，污染分為兩個類型：1. 機(jī)身外部的污染。通常由于離心，震蕩，或者PCR加熱造成氣溶膠彌漫在實驗環(huán)境中，沾染在機(jī)身外側(cè)�；蛘咴诓僮鲿r如果不小心機(jī)身外側(cè)接觸了離心管的內(nèi)壁，可能會造成移液器污染。在后續(xù)實驗中可能不小心觸碰樣品管，離心管等可能會造成假陽性風(fēng)險。2. 吸液時倒吸或者吸液的氣溶膠污染。如果操作樣品時未使用濾芯吸頭，并且發(fā)生誤操作，致使樣品倒吸入移液器，沒有及時清理，可能會污染后面的樣品造成假陽性風(fēng)險。吸液時氣溶膠的污染也不可小覷，以20 μl移液器為例，在室溫20 oC, 相對濕度為約60% RH時，吸液時的蒸發(fā)率可達(dá)到0.046 μl/s,相當(dāng)于每秒蒸發(fā)0.23%的總移液體積。這種情況下如果沒有使用濾芯吸頭，不可避免蒸發(fā)的液體裹挾著樣品會進(jìn)入移液器下半支，并在后續(xù)的操作中吹入后續(xù)的樣品中造成假陽性風(fēng)險。

 

發(fā)生倒吸或者誤碰樣品管內(nèi)壁后立刻停止操作進(jìn)行清潔。氣溶膠的污染可以通過定時清潔來減少。

 

接下來介紹如何拆卸與清潔德國BRAND 的Transferpette® S移液器：

第一步，使用75%乙醇或異丙醇擦拭移液器外表面進(jìn)行基礎(chǔ)清潔與消毒

 

 

第二步，旋轉(zhuǎn)下半支卸下下半支，通過旋轉(zhuǎn)拆出活塞（I），彈簧密封圈（II），吸頭錐套筒(III)，以及彈吸頭套筒(IV)。

 

 

 

第三步，所有部件置于75%乙醇或者異丙醇中浸泡30分鐘。取出用去離子水沖干凈。

 

 

第四步，將所有部件置于含有去垢劑的超聲波洗滌儀內(nèi)超聲清潔10分鐘，取出用去離子水沖干凈。

 

 

第五步，視核酸污染情況嚴(yán)重程度，吸頭錐套筒，活塞等配件可置于甘氨酸-鹽酸緩沖液（pH約2.0）中浸泡過夜。取出后用去離子水沖洗干凈。甘氨酸-鹽酸緩沖液配置方法：取30.6 g NaCl,39.2 g 甘氨酸，加去離子水定容至523 ml，加1 N HCl 477 ml,配置成10 x緩沖液。使用時按1:10稀釋。嚴(yán)重污染的密封圈應(yīng)更換。

 

第六步，部件晾干后，為活塞與密封圈涂上原裝硅油。

 

 

第七步，按照第二步相反的方向旋轉(zhuǎn)安裝上移液器即可。

 

對于具有感染性污染的移液器，為了人員安全，操作全程應(yīng)佩戴如手套、口罩、護(hù)目鏡等防護(hù)用品，超聲時應(yīng)蓋上蓋子，并在超聲清潔后將移液器于滅菌鍋中121oC 滅菌20分鐘，再進(jìn)行后續(xù)清潔。有時會為了減少感染風(fēng)險，將高溫滅菌操作為第一步進(jìn)行，注意移液器機(jī)身內(nèi)外如有倒吸凝結(jié)的污垢，未清潔的高溫滅菌操作可能不能實現(xiàn)完全消毒，并可能損壞移液器。

最后須強(qiáng)調(diào)，做PCR檢測實驗時推薦使用BRAND預(yù)裝滅菌濾芯吸頭，可避免人工裝吸頭引入污染的風(fēng)險，以及避免操作樣品時吸入氣溶膠造成假陽性的風(fēng)險。

 

 

德國BRAND簡介：BRAND GMBH + CO KG是德國玻璃與塑料體積量具與移液設(shè)備的領(lǐng)導(dǎo)品牌，自1998年起被授予德國計量校準(zhǔn)服務(wù)（DKD,現(xiàn)更名為DAkks）資質(zhì)。在移液與生命科學(xué)耗材上有幾十年的生產(chǎn)與技術(shù)經(jīng)驗。如果對于BRAND感興趣，可以聯(lián)絡(luò)BRAND中國子公司普蘭德（上海）貿(mào)易有限公司。聯(lián)系方式:021-64222318,或者info@brand.cn.com.