利用PIPETTY電動(dòng)移液器進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、PIPETTY MSIC01-02-1000電動(dòng)移液器一把
2、配套吸頭FDT-1000A-1-TLSF
3、試劑：CCK8檢測(cè)試劑盒、DMEM或其他培養(yǎng)基、雙抗、FBS、PBS、DMSO
4、細(xì)胞計(jì)數(shù)板
5、5ML離心管
6、96孔板
7、記號(hào)筆1只

• 實(shí)驗(yàn)原理

CCK8全稱(chēng)Cell Counting Kit-8試劑，可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有水溶性的四唑鹽WST-8[化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
 
                   CKK-8檢測(cè)原理

• 操作步驟

1、先在蓋子上標(biāo)記好信息
 
2、孔板最外圈加PBS
 
3、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，最好不要超過(guò)10^8/ML，然后將PIPETTY移液槍調(diào)到混勻模式，吹勻細(xì)胞懸液（如果用普通移液槍的話(huà)，細(xì)胞一定要吹打均勻，呈單細(xì)胞！）
 
4、將移液槍調(diào)到100μL的分液模式開(kāi)始鋪細(xì)胞，為了避免細(xì)胞分布不均勻，先用移液槍將吹打均勻的細(xì)胞吸起來(lái)，讓后將槍頭緊貼著孔的一側(cè)壁(注意槍頭的尖不要接觸孔底)，然后將槍頭中的細(xì)胞緩緩的打下去，種好之后千萬(wàn)不要搖晃板子。
 
 
5、第一個(gè)細(xì)胞鋪完啦，現(xiàn)在重復(fù)以上步驟開(kāi)始鋪第二個(gè)細(xì)胞，(這里有個(gè)小TIPS，如果用普通移液槍需要鋪10個(gè)孔混勻一次細(xì)胞液，避免細(xì)胞沉降帶來(lái)誤差，但是PIPETTY移液槍非常便捷，一步到位，吹打一次就OK啦）
 
補(bǔ)充：從6孔板到96空板要細(xì)胞分散均勻，先用培養(yǎng)基把細(xì)胞稀釋好，再把培養(yǎng)板放在適當(dāng)?shù)奈恢�，加入�?xì)胞時(shí)和加入細(xì)胞后不移動(dòng)培養(yǎng)板;如果空中有的地方?jīng)]有培養(yǎng)基可吹打，但不要移動(dòng)培養(yǎng)板，加入細(xì)胞后靜置20-30分鐘再移入培養(yǎng)箱。這樣細(xì)胞一般都能長(zhǎng)的很均勻。當(dāng)然，前提是細(xì)胞消化的很好。