MiSelect R CTCs 計數(shù)和 PD-L1分析在結(jié)直腸癌研究的應(yīng)用

（一） 結(jié)直腸癌與 CTCs 檢測

結(jié)直腸癌（colorectal cancer， CRC） 是胃腸道中常見的惡性腫瘤，早期癥狀不明顯，隨著癌腫的增大而表現(xiàn)排便習(xí)慣改變、便血、腹瀉、腹瀉與便秘交替、局部腹痛等癥狀，晚期則表現(xiàn)貧血、體重減輕等全身癥狀。其發(fā)病率和病死率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。 結(jié)直腸癌可以發(fā)生在結(jié)腸或直腸的任何部位,但以直腸、乙狀結(jié)腸為多見，其余依次見于盲腸、 升結(jié)腸、 降結(jié)腸及橫結(jié)腸。癌瘤大多數(shù)為腺癌，少數(shù)為鱗狀上皮癌及粘液癌。本病可以通過淋巴、血液循環(huán)及直接蔓延等途徑,播散到其他組織和臟器。根據(jù)臨床表現(xiàn)、 X 射線鋇劑灌腸或纖維結(jié)腸鏡檢查，可以確診。治療的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)、及時診斷和手術(shù)根治。預(yù)后取決于早期診斷和及時手術(shù)治療。一般癌腫只限于腸壁者預(yù)后較好，浸潤到腸外者預(yù)后較差，年輕患者、癌瘤浸潤廣泛、有轉(zhuǎn)移者或有并發(fā)癥者預(yù)后不良【1】。結(jié)直腸癌的分級如圖 1、圖 2 所示。 治療指導(dǎo)方案見表 1【2】，具體診療建議請參考《CSCO 結(jié)直腸癌診療指南（2019 年版）》【3】。 循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell, CTC)是指由原發(fā)灶脫落，存在于外周血的各類腫瘤細(xì)胞的統(tǒng)稱【4】 。 既包括游離的單個 CTC，也有聚集成團(tuán)的細(xì)胞團(tuán)。 CTCs 進(jìn)入血液后，會隨著血液循環(huán)游走全身，能逃避機(jī)體免疫，在原發(fā)或遠(yuǎn)處臟器駐留，從而形成復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移病灶。因此 CTCs 可以更完整的實時反應(yīng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等相關(guān)信息。

根據(jù)治療指導(dǎo)方案（表 1），對于 StageⅡ的患者，如果可以通過 CTCs 檢測預(yù)測癌細(xì)胞是否有入侵血管或淋巴管的傾向，就可以幫助判斷是否要在手術(shù)后進(jìn)行化療。對于 StageⅢ和 Stage Ⅳ的患者，對 CTCs 的檢測也可以幫助判斷在切除腫瘤和擴(kuò)散的淋巴結(jié)組織及其他組織后，患者是否有發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。

如果早期發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌可以得到較高的治愈率： Stage Ⅰ的患者 5 年生存率為94%， Stage Ⅱ的患者 5 年生存率為 82%， Stage Ⅲ的患者 5 年生存率為 67%， Stage Ⅳ的患者 5 年生存率僅為 11%【5】。 如果在剛出現(xiàn)癥狀時就能通過 CTCs 檢測發(fā)現(xiàn)癌癥風(fēng)險，也可以促進(jìn)患者進(jìn)行全面體檢,在早期發(fā)現(xiàn)癌腫瘤。

（二） MiSelect R 研究結(jié)直腸癌 CTCs

2.1 試驗設(shè)計

科學(xué)家設(shè)計的試驗流程如圖 3 所示。 手術(shù)前第 1 次取樣，為腸系膜靜脈血（Mesenteric Venous Blood， MVB）；手術(shù)后在第 3、 6、 12、 24 個月進(jìn)行第 2-5 次取樣，為外周血（Peripheral Blood， PB）。第 1 次取樣用于判斷患者的癌癥風(fēng)險等級，對風(fēng)險等級高的患者進(jìn)行組合療法（如增加化療）；第 2-5 次取樣用于監(jiān)測早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的患者，對 CTCs 陽性的患者會建議更頻繁的監(jiān)測和積極治療。 2.2 試驗的患者/樣本信息

MiSelect R 研究的患者/樣本信息如表 2-4：中位跟進(jìn)時間是 16 個月， 24%的招募患者的跟進(jìn)時間超過 2 年。 2.3 MiSelect R 和 CellSearch 的結(jié)果對比

強生公司的 CellSearch 是目前為止經(jīng)過 FDA 批準(zhǔn)的可用于臨床檢驗的 CTCs 檢測儀器，但 2015 年已退出中國市場。 根據(jù)圖 4， 用 CellSearch 對 196 名患者的 333 份樣本進(jìn)行檢測， 7.5mL 外周血中檢測到的 CTCs 數(shù)量是 4±11 個，中位數(shù)（≥2）是 5 個。 而用MiSelect R 檢測，腸系膜靜脈血樣本中的平均 CTCs 數(shù)量大約為 10 個，外周血樣本中的平均 CTCs 數(shù)量大約＜3 個。

CellSearch 和 MiSelect R 的數(shù)據(jù)都說明，從外周血里不易檢測到結(jié)直腸癌的 CTCs，而 MiSelect R 的數(shù)據(jù)說明： 如果用腸系膜靜脈血檢測， 則可以檢測到更多的 CTCs， 因此可以增加結(jié)直腸癌 CTCs 檢測的靈敏度。 CTCs 進(jìn)行計數(shù)可以增加結(jié)直腸癌 CTCs 檢測的靈敏度【6】。
2.5 試驗小結(jié)及展望

MiSelect R 研究結(jié)直腸癌 CTCs 的實驗結(jié)果顯示： 對于手術(shù)前取樣的腸系膜靜脈血（MVB）樣本， CTCs 和 PD-L1(+) CTCs 的數(shù)目和腫瘤階段密切相關(guān)， PD-L1(+) CTCs 的數(shù)目可以預(yù)示腫瘤未來是否會入侵血管和淋巴管，是否是潛在高風(fēng)險族群？ 對 Stage Ⅱ的患者， MVBCTCs 的檢測可以幫助確認(rèn)在手術(shù)后是否要進(jìn)行化療？ 手術(shù)后取樣的外周血（PB）樣本，可用來預(yù)測早期復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者，有利于對患者進(jìn)行長期跟進(jìn)。 對于本次臨床研究， MiCareo公司會繼續(xù)跟進(jìn)患者， 收集更多的樣本進(jìn)行后續(xù)研究【6】。

（三） MiSelect R 介紹

臺灣 MiCareo 公司的 MiSelect R“稀有細(xì)胞高效獲取分析系統(tǒng)” 是目前一款集稀有細(xì)胞（包括“循環(huán)腫瘤細(xì)胞 CTCs” 、“稀有免疫細(xì)胞”等）富集與鑒定于一體的全自動化設(shè)備，技術(shù)法寶包括微流控技術(shù)、激光分選、體積過濾和熒光標(biāo)記成像，既可以對稀有細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)、分析和鑒定（生物標(biāo)志物分析），又可以獲得高捕獲率、高純度、高活性的稀有細(xì)胞，供下游研究使用。

MiSelect R 的原理請參考： 稀有細(xì)胞檢測的突破——MiSelect R 助力 CTCs 檢測。


（四） 總結(jié)

和市面上其他稀有細(xì)胞檢測方法不同， MiSelect R 可對稀有細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)、分析、鑒定，并獲得活細(xì)胞。具有高純度（>60%） 、高捕獲率（98.5%） 、高細(xì)胞活性（>99%） 、高檢測靈敏度、 可重復(fù)性（CV<10%） 、可視性、 廣譜性以及全自動運行（操作簡單，全血上樣，全自動運行，單機(jī)集成）等優(yōu)點，可檢測 EpCAM 低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞株，靈敏度是流式細(xì)胞儀的 2 倍�？捎糜� CTCs 研究、癌癥藥物的伴隨診斷、稀有功能性免疫細(xì)胞研究，或產(chǎn)前無創(chuàng)檢測，是非常強大的稀有細(xì)胞高效獲取分析系統(tǒng)。

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號： 參考文獻(xiàn)：
【1】 百度百科：結(jié)直腸癌
【2】 American Cancer Society, https://www.cancer.org/cancer/colon-rectalcancer/treating/by-stage-colon.html
【3】《CSCO 結(jié)直腸癌診療指南（2019 年版）》
【4】 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的現(xiàn)狀及發(fā)展，李莉， 2017-7-26
【5】 JNCI: Journal of the National Cancer Institute 101.20 (2009): 1412-1422.
【6】 MiSelect CRC CTCs Clinical Report.