NEPA GENE 在新冠肺炎的治療性單克隆抗體藥物研究的應(yīng)用
隨著新冠肺炎的全球疫情不斷升溫，3月17日，著名的生物技術(shù)公司Trans Chromosomics（TC）在官網(wǎng)（https://trans-chromo.wixsite.com/transchromosomics）發(fā)表一項(xiàng)聲明，表示已經(jīng)與美國(guó)Precision Antibody（PA）公司達(dá)成一項(xiàng)合作協(xié)議，共同研發(fā)應(yīng)用于COVID-19的全人源的治療性單克隆抗體藥物。
日本TC公司創(chuàng)立于2014年，由轉(zhuǎn)基因小鼠領(lǐng)域的著名學(xué)者M(jìn)itsuoOshimura創(chuàng)建。1997年，時(shí)任日本Tottori 大學(xué)的分子與細(xì)胞遺傳學(xué)部研究員的MitsuoOshimura博士與當(dāng)時(shí)在日本麒麟啤酒公司（Kirin Brewery）任職的Isao Ishida博士合作，通過(guò)轉(zhuǎn)染色體的方式，全球首次成功的建立了可以表達(dá)全人源抗體蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠。1997年6月，這一成果發(fā)表在《自然遺傳》（1）上，立刻引起轟動(dòng)，被《紐約時(shí)報(bào)》和《華盛頓郵報(bào)》等多家媒體報(bào)道。用染色體片斷做載體，日本研究團(tuán)隊(duì)把轉(zhuǎn)基因的極限擴(kuò)大了至少10倍。這種用新方法改造的小鼠被命名為T(mén)C小鼠，或轉(zhuǎn)染色體小鼠。人的抗體庫(kù)在小鼠的B細(xì)胞群里得到完整表達(dá)。
擁有成熟的轉(zhuǎn)染色體小鼠技術(shù)的日本TC公司，通過(guò)提供表達(dá)全人源抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠，與美國(guó)PA公司合作進(jìn)行用于COVID-19的全人源的治療性單克隆抗體藥物研究，這是一場(chǎng)非常有意義的強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合的國(guó)際合作。后者（PA公司）在抗體獲取技術(shù)方面有長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)和成熟的技術(shù)，歷年來(lái)與許多全球大型制藥公司和國(guó)家衛(wèi)生研究院（NIH）等公共組織合作取得成功。同時(shí)，TC公司還與日本國(guó)家傳染病研究所（NIID）、Tottori 大學(xué)緊密合作，共同進(jìn)行技術(shù)攻關(guān)，爭(zhēng)取早日成功獲得COVID-19 治療性抗體藥物。
據(jù)日本TC公司稱(chēng)，有許多公司致力于發(fā)現(xiàn)抗COVID-19的治療藥物，例如1）重新利用現(xiàn)有藥物，2）發(fā)現(xiàn)疫苗，3）單克隆抗體。在現(xiàn)有的各種抗體捕獲技術(shù)中，TC公司選擇DNA免疫法以最快的速度獲得單克隆抗體。TC公司的重點(diǎn)將是在COVID-19的包膜上表達(dá)的棘突蛋白（S蛋白），它是病毒進(jìn)入人體的一個(gè)重要部分。
日本TC公司和美國(guó)PA公司都采購(gòu)了NEPAGENE公司的設(shè)備，并將其用于過(guò)往、及現(xiàn)今緊鑼密鼓進(jìn)行中的COVID-19相關(guān)研究。他們配置了NEPA21全能型高效基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng)以及ECFG21細(xì)胞融合儀，NEPAGENE公司正為包括他們?cè)趦?nèi)的全球客戶(hù)提供全面周到的技術(shù)支持。希望我們的研究者，能早日找到防止COVID-19大流行和繼續(xù)威脅人類(lèi)生命的方法。
低調(diào)的分割線
NEPAGENE公司是世界知名的電轉(zhuǎn)染和電融合設(shè)備研發(fā)及生產(chǎn)廠家。借助NEPA21卓越的基因?qū)牍δ?/strong>，研究者可以便捷、高效地進(jìn)行體外或活體的轉(zhuǎn)基因操作，可用于生產(chǎn)基因組轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，或用于幫助動(dòng)物免疫，獲得治療性抗體。早在2015年發(fā)表在Vaccine的文獻(xiàn)報(bào)道，應(yīng)用NEPA21進(jìn)行小鼠的肌肉電轉(zhuǎn)來(lái)導(dǎo)入DNA疫苗用于研究登革熱疫苗的研發(fā)，獲得表達(dá)IgG2b或IgG3亞類(lèi)抗體的小鼠。這項(xiàng)應(yīng)用也可助力新型冠狀病毒有關(guān)的疫苗或單克隆抗體研發(fā)【2】。
除此之外，在2017年，NEPA21應(yīng)用在小鼠肌內(nèi)或腫瘤部位進(jìn)行DNA的體外電轉(zhuǎn)，通過(guò)在MC38腫瘤模型小鼠中記性肌肉用于一些抗體基因的藥代動(dòng)力學(xué)的研究，實(shí)驗(yàn)證實(shí)，通過(guò)電轉(zhuǎn)的方式瞬時(shí)性大大提高。
由于T細(xì)胞識(shí)別的人類(lèi)皰疹病毒6B（HHV-6B）表位的鑒定可能有助于開(kāi)發(fā)潛在的疫苗和免疫療法。 2019年，有作者通過(guò)使用NEPA21體內(nèi)電穿孔的方式，將編碼BgQ1的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)到小鼠肌肉中，在BALB / c小鼠中鑒定出的CD4 +和CD8 + T細(xì)胞表位可能是用于開(kāi)發(fā)T細(xì)胞反應(yīng)，誘導(dǎo)HHV-6B疫苗或免疫療法的良好動(dòng)物模型系統(tǒng)�！�3】）
不僅在人類(lèi)皰疹病毒方面，NEPA21還應(yīng)用到了登革熱病毒（DENV）疫苗的研究中，2019年，日本神戶(hù)大學(xué)，發(fā)現(xiàn)編碼由抗原和對(duì)DC內(nèi)吞受體DEC205特異的單鏈Fv抗體（scFv）組成的融合蛋白的DNA疫苗，可誘導(dǎo)對(duì)目標(biāo)抗原的強(qiáng)烈免疫反應(yīng)。將產(chǎn)生編碼與DENV2包膜蛋白結(jié)構(gòu)域III（EDIII）融合的scFvαDEC205或同種型對(duì)照（scFv ISO）的質(zhì)粒在免疫小鼠中評(píng)估EDIII特異性免疫，最終發(fā)現(xiàn)，使用編碼scFvαDEC205的DNA疫苗將DENV2 EDIII蛋白靶向DC可以改善抗體和CD4 + T細(xì)胞反應(yīng)。該策略為使用編碼針對(duì)DC抗原的DNA疫苗作為增加免疫原性的策略開(kāi)辟了前景【4】。
借助ECFG21的細(xì)胞融合功能，研究者可進(jìn)行高效的脾細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞，或進(jìn)行卵母細(xì)胞激活獲得體細(xì)胞克隆動(dòng)物等。美國(guó)PA公司經(jīng)過(guò)對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)難獲得陽(yáng)性克隆的小分子抗原、多肽類(lèi)抗原，使用ECFG21的融合效率甚至可達(dá)PEG的25~100 倍！
參考文獻(xiàn)
(1) omizuka, K., Yoshida, H., Uejima, H. et al. Functional expression and germline atransmission of a human chromosome fragment in chimaeric mice. Nat Genet 16, 133–143 (1997). https://doi.org/10.1038/ng0697-133
(2) Atsushi Yamanaka, PannamthipPitaksajjakul, PongramaRamasoota, EijiKonishi
Expression of Enhancing-Activity-Free Neutralizing Antibody Against Dengue Type 1 Virus in Plasmid-Inoculated Mice
Vaccine, 33 (45), 6070-7 2015 Nov 9
(3) Satoshi Nagamata, TaikiAoshi, Akiko Kawabata, Yoshiaki Yamagishi, Mitsuhiro Nishimura, SoichiroKuwabara, Kouki Murakami, Hideto Yamada, Yasuko Mori
Identification of CD4 and H-2K d-restricted Cytotoxic T Lymphocyte Epitopes on the Human Herpesvirus 6B Glycoprotein Q1 Protein
Sci Rep, 9 (1), 3911 2019 Mar 7
(4) Arthur BaruelZaneti,Dendritic Cell Targeting Using a DNA Vaccine Induces Specific Antibodies and CD4 + T Cells to the Dengue Virus Envelope Protein Domain III
Front Immunol, 10, 59 2019 Jan 29 eCollection 2019
產(chǎn)品小貼士
NEPA 21 高效基因電轉(zhuǎn)染儀
NEPA21 高效基因電轉(zhuǎn)染儀，專(zhuān)門(mén)針對(duì)難轉(zhuǎn)染的原代免疫細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、活體動(dòng)物、受精卵及宮內(nèi)胚胎等轉(zhuǎn)染，多篇文獻(xiàn)支持，是Crisper/Cas-9 基因編輯的第一品牌電轉(zhuǎn)系統(tǒng)！
ECFG21高效細(xì)胞電融合儀
ECFG21高效細(xì)胞電融合儀，在常規(guī)的電融合程序基礎(chǔ)上，配合獨(dú)有的電壓衰減設(shè)計(jì)，更長(zhǎng)的融合后修復(fù)時(shí)間，可在保證細(xì)胞存活率的同時(shí)，提高細(xì)胞的融合率和雜合體穩(wěn)定性。
企業(yè)介紹
廣州市華粵行儀器有限公司隸屬于華粵企業(yè)集團(tuán)，1991年創(chuàng)建于廣州�，F(xiàn)已成為中國(guó)最具規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備供應(yīng)商之一，是全球遍及生命科學(xué)、食品安全、IVF、生物制藥、實(shí)驗(yàn)室耗材等領(lǐng)域的70多家最具競(jìng)爭(zhēng)力的生產(chǎn)廠家在中國(guó)的總代理商。
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