生物學應用廣泛的花青染料-分類與選型
今天百螢給大家?guī)Я说氖腔ㄇ嗨丶捌溲苌锏慕榻B和推薦。與其他經(jīng)典熒光染料相比，花青染料的熒光信號如何？可用于哪些領(lǐng)域？光譜性質(zhì)是怎樣的？效果良好的花青類產(chǎn)品都有哪些？能修飾哪些反應基團？感興趣的朋友一起來看看吧！
熒光素及其衍生物
“花青”這個名詞是來自于聚次甲基組合成染料家族中的，它是一個非系統(tǒng)名稱，cyanin一詞源自英語單詞“ cyan”，通常表示藍綠色。 花青染料的摩爾消光系數(shù)（約150,000至300,000 M-1cm-1）非常大，結(jié)合適度的量子產(chǎn)率，使它可以產(chǎn)生極其明亮的熒光信號。 事實證明，花青在許多領(lǐng)域都非常有用，包括成像技術(shù)，生物學，激光技術(shù)和分析化學等。 AAT Bioquest提供了最多的花青染料集合，它們可用作多種生物學應用的分子探針。 對于某些生物學應用，花青可以有利地替代其他常規(guī)染料，例如熒光素和羅丹明。
花青染料Cy3和Cy5
圖1.Cy3（左），Cy5（中）和Cy7（右）染料的最大吸光度（虛線）和發(fā)射光（陰影區(qū)域）。
在花青染料中，最受歡迎的是發(fā)出黃綠色熒光（約550 nm激發(fā)，約570 nm發(fā)射）的Cy3和在紅色區(qū)域發(fā)出熒光（約650 nm激發(fā)，約670 nm發(fā)射）的Cy5。 由于它們的光譜重疊極小，通常將Cy3和Cy5結(jié)合起來進行檢測。Cy3可以通過各種熒光儀，成像儀和帶有TRITC標準濾波片的顯微鏡進行檢測。 由于其較高的摩爾消光系數(shù)，Cy3染料也很容易在電泳凝膠和溶液中用肉眼觀察。 Cy5的消光系數(shù)也非常高（在凝膠電泳中肉眼可檢測到1 nmol），并且在紅色區(qū)域具有最大的熒光發(fā)射峰，因此Cy5成為了紅色熒光染料的流行替代品。
光譜性質(zhì)
| 產(chǎn)品名稱 | 激發(fā)光線 | Ex / Em（nm） | 濾波片組 | 消光系數(shù)（ε） | 量子產(chǎn)率（Φ） |
| Cy3 | 532nm | 554/568nm | Cy3 / TRITC | 150,000 | 0.15 |
| Cy5 | 633-647nm | 650/669nm | Cy5 | 250,000 | 0.27 |
| Cy7 | 730nm | 754/778nm | Cy7 | 250,000 | 0.3 |
磺化與非磺化花青
磺化和非磺化花青染料具有非常相似的熒光特性，在許多應用中它們可以互換使用。染料之間的差別主要在于它們的溶解度。在標記生物分子之前，非磺化花青必須溶解在有機溶劑中，如DMF或DMSO。而磺化花青可用于水性條件（帶電荷的磺酸鹽基團可減少染料和共軛物的聚集）。為了通過對水或水緩沖液的透析純化，必須使用磺化花青有效去除未反應的染料。通過凝膠過濾、色譜或電泳純化對磺化和非磺化菁都是合適的。
表2.磺化和非磺化Cy3，Cy5和Cy7染料的光譜比較。
| Cy3 | Cy5 | Cy7 | ||||
| 形式 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 | 磺化 | 非磺化 |
| Ex / Em（nm） | 554/568 | 650/669 | 754/778 | |||
| 過濾片組 | Cy/ TRITC | Cy5 | Cy7 | |||
| ε(消光系數(shù) cm-1M-1) | 150,000 | 140,000 | 250,000 | 230,000 | 250,000 | 250,000 |
| Φ(熒光量子產(chǎn)率) | 0.10 | 0.07 | 0.27 | 0.16 | 0.12 | 0.2 |
| 貨號 | 263 | 191 | 268 | 195 | 161 | 198 |
花青產(chǎn)品類型
我們提供多種花青產(chǎn)品選擇，包括用于標記生物分子，綴合物，指示劑等的活性染料和結(jié)合試劑盒。
花青反應性染料
用于修飾以下反應基團的Cy染料標記的化學試劑：
| 胺 | 巰基 | 羰基 | 點擊化學 |
花青染料標記的熒光二抗綴合物
從多種花青標記的熒光二抗和鏈霉親和素偶聯(lián)物中選擇，用于一抗的信號放大檢測：
| 山羊抗小鼠IgG | 山羊抗兔IgG | 鏈霉親和素 |
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