RACE技術(shù)在基因工程抗體中的應(yīng)用
20世紀(jì)80年代后期，隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，使得人們可以通過基因工程技術(shù)對天然的分子進行人為的改造，這為抗體藥物帶來了新的突破點和希望。了解和闡明抗體分子的結(jié)構(gòu)及功能，為人類疾病診斷及治療提供了新的推動力。
基因工程抗體
RACE技術(shù)
01
RACE技術(shù)定義
RACE技術(shù)即cDNA末端快速擴增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends），基于PCR從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中間片段序列，對未知兩端序列進行擴增的一項技術(shù)。
02
RACE和普通PCR在重組抗體中的應(yīng)用比較
普通PCR和RACE應(yīng)用比較
普通PCR在抗體基因擴增中的應(yīng)用
RACE法在抗體基因擴增中的應(yīng)用
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普通PCR法在重組抗體中的應(yīng)用劣勢 |
RACE技術(shù)在重組抗體中的應(yīng)用優(yōu)勢 |
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需要很多引物擴增測試 |
RACE技術(shù)特別適合 IG famliy 很多的物種，例如小鼠、人等 |
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N端序列無法精準(zhǔn)
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可以獲得完整的抗體可變區(qū)序列，信號肽序列以及5' UTR區(qū)域 |
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目前主要基于已知序列設(shè)計引物，無法完全覆蓋 |
RACE技術(shù)體系建立后，可以應(yīng)用于其它物種以及未知序列物種 |
制備基因工程抗體時需要進行鼠雜交瘤擴增，通常利用5’RACE技術(shù)。5’RACE技術(shù)的優(yōu)化將極大的提高基因工程抗體制備的成功率。華安生物進行5’RACE時，常使用加尾法，根據(jù)接頭引物和自己設(shè)計特異引物，設(shè)計巢式PCR來進行二次擴增。
5’RACE技術(shù)原理
RACE擴增鼠雜交瘤-引物設(shè)計
1.正向引物：加接頭序列即：
2.反向引物：選擇 mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 相似性較高的CH1區(qū)域或其它保守區(qū)域設(shè)計下游引物。
Tips:
在逆轉(zhuǎn)錄、TdT加尾、PCR擴增這三個連續(xù)的酶促反應(yīng)過程中，任何一步的失敗都會導(dǎo)致前功盡棄。
目前華安生物也采用RACE技術(shù)開發(fā)生產(chǎn)一系列重組兔單克隆抗體，感興趣的同學(xué)可以來看看哦~
