基因敲除（KO）在驗證抗體特異性的應用

抗體作為基礎科學研究和臨床試驗常用的工具之一，主要通過抗原-抗體的反應揭示蛋白質在生命活動中的變化。

盡管它們被廣泛的使用，但是沒有相關標準以確保商業(yè)抗體特異性和質量上的一致性。這使得科學界一直存在“重現危機”，浪費了科學家們大量的時間和金錢，妨礙生命科學研究的快速發(fā)展。因此，對抗體進行敏感性和特異性測試，確保質量和可重復性至關重要。

眾所周知，基因敲除（Knock Out,KO）作為最被大家認可、最被信任的一種抗體特異性驗證方法，是一項非常穩(wěn)健的技術，可在不表達目的蛋白的 KO 細胞系或組織中通過檢測目的抗體來確證其特異性。

為了確定華安抗體產品的功能性、特異性、敏感性，我們對不同的產品是采用不同的驗證策略來確保我們抗體產品在科研工作中的真實有效。為了確保大家可以擁有高度特異性的抗體，我們通過 CRISPR-Cas9 基因組編輯來進行 KO 驗證，從而給大家提供研究所需的可靠結果。

CRISPR/Cas9介導編碼基因KO的原理，在Cas9剪切DNA導致雙鏈斷裂（DSB）后，細胞利用非同源末端連接（NHEJ）進行修復。NHEJ修復會在DSB位點隨機引入堿基的插入或者缺失（Indel）。如果這些Indel不是3的倍數將會導致后續(xù)的閱讀框發(fā)生移碼，這種移碼往往會產生提前終止密碼子（premature termination codon，PTC）,導致蛋白功能的喪失（提前翻譯終止的多肽一般會被降解），從而達到KO效果。這種技術在最近幾年實用性大大增加。這種方法的優(yōu)點在于，它在同一個細胞系中提供了陽性和陰性的表達模型。

在 KO 細胞系中測試特異性抗體時，特異性抗體不會產生信號，但在野生型 (WT) 細胞系測試特異性抗體時，特異性抗體會產生特異性靶蛋白信號。以這種方式，KO 驗證作為真正的陰性對照，以確認抗體對目標蛋白的特異性。
華安生物致力于為全球的科研工作者和工業(yè)客戶提供高品質的抗體試劑及抗體服務，利用基因敲除技術深入應用于抗體產品驗證，并將形成KO驗證抗體、KO細胞株、KO細胞裂解物等多條產品線。

KO驗證抗體案例展示

01.Anti-Caspase-3 antibody(ET1602-39)

Western Blot analysis of Caspase-3 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Caspase 3 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1602-39, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

02.Anti-NF-kB p65 antibody(ET1603-12)

Western Blot analysis of NF-κB p65 on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela NF-κB p65 KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (ET1603-12, 1/500)was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit Ig-HRP Secondary Antibody (HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.

03.Anti-Vimentin antibody(EM0401)

Western Blot analysis of Vimentin on Wild-type HeLa cell(Control) and Hela Vimentin KnockOut cell. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in PBS for 1 hour at room temperature. The primary antibody (EM0401, 1/500) was used in 5% BSA at room temperature for 2 hours. Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody(HA1001) at 1:5,000 dilution was used for 1 hour at room temperature.


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