蛋白質(zhì)組學(xué) | 生物樣本收集的這些小知識(shí)您都get到了嗎？ (上)

組織和生物體液是用于檢測(cè)疾病和決定患者治療的重要信息來源。

通過研究正�；蚣膊〗M織或者生物體液樣本的蛋白質(zhì)組特征，可以詳細(xì)描述和量化與疾病狀態(tài)相關(guān)的、定義的或?qū)е录膊“l(fā)生的蛋白質(zhì)差異，以闡明病理生物學(xué)、改進(jìn)疾病分類或確定新的治療靶點(diǎn)[1,2]。

如何合理準(zhǔn)確地收集這些樣本對(duì)于后續(xù)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)來講，顯得尤為重要。本次小編為你傾情獻(xiàn)上它們的合理收集方式，為您的樣本保駕護(hù)航。

 

1.組織篇

樣品制備在蛋白質(zhì)組研究中起著重要作用，被認(rèn)為是組織分析中最重要的步驟之一。

組織收樣步驟

1. 首先準(zhǔn)備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管，并且用油性記號(hào)筆在鋁箔或凍存管外表多處寫明樣本編號(hào)；

2. 每個(gè)樣本的取材部位要盡量一致，準(zhǔn)確切除所需組織后，剔除無關(guān)的干擾組織（血管、脂肪、結(jié)締組織等）；

3. 迅速用預(yù)冷的生理鹽水或預(yù)冷無酶水配制的1*PBS洗滌樣本，去除殘留血液和污染物；

4. 用無塵吸水紙快速吸干表面的液體，用滅菌的組織剪或手術(shù)刀將組織切成100mg左右小塊；

5. 液氮速凍5min，保存于-80℃；

組織樣本量要求：200mg /樣本

 

2.體液篇

體液樣本類型有：血漿和血清、尿液、腦脊液、耳屎、鼻分泌物、唾液、淚液、乳汁、支氣管肺泡液、乳頭吸液、羊水、膽汁、宮頸陰道液和精漿等[4]。體液樣本類型較多，本篇重點(diǎn)介紹最常見的前四種體液樣本收集方法，更多的需求可向小篇索要文獻(xiàn)進(jìn)行詳細(xì)研究。

①血漿收樣步驟

1. 建議使用紫色EDTA抗凝管采集血液；

2. 輕輕地上下顛倒混勻 8-10 次，立即將全血置于4℃或冰盒中正立放置；

3. 4℃，≤1300g（1200g或者1000g）離心10 min，取上清（血樣需要在在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血漿分離，依據(jù)抗凝管操作說明或者客戶實(shí)驗(yàn)室血漿分離步驟進(jìn)行操作）；

4. 用移液器將上清（血漿）轉(zhuǎn)移到離心管中分裝，【如果樣本量體積較大，建議分裝保存（每管分裝200~300ul）】，可加入蛋白酶抑制劑（非必須）；

5. 液氮速凍5min，保存于-80℃。

血清樣本量要求：200ul/樣本

②血清收樣步驟

1. 使用真空采血管收集血液；

2. 輕輕地上下顛倒混勻5-6 次；

3. 4℃，靜置30~60min，讓全血凝集；

4. 4℃，≤1300g（1200g或者1000g）離心10min，立即取上清；

5. 用移液器將上層淡黃色血清轉(zhuǎn)移到離心管中（如果樣本量體積較大， 建議分裝保存（每管分裝200~300ul）），可加入蛋白酶抑制劑（非必須）；

6. 液氮速凍5min，保存于-80℃。

血清樣本量要求：200ul/樣本

③尿液收樣步驟

1. 收集中段晨尿；

2. 5,000g，4℃離心30min，去除細(xì)胞及碎片；

3. 用移液器取上清轉(zhuǎn)移至進(jìn)口的離子管，轉(zhuǎn)移至-80℃的冰箱凍存。

尿液樣本量要求：15ml/sample

 

④腦脊液收樣步驟

1. 2000×g 離心5 min，（或使用0.22μm 濾膜過濾），取上清；

2. 液氮速凍5 min，保存于-80℃。

腦脊液樣本量要求：2ml/sample

友情提示：以上樣本量需求僅針對(duì)的是常規(guī)蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)，如：TMT、Label Free ，DIA等，若需要做修飾蛋白組學(xué)，則需要增加3~10倍不等的用量。

百趣生物已檢測(cè)樣本類型
 

參考文獻(xiàn)：

[1] Dapic Irena,Baljeu-Neuman Lucia,Uwugiaren Naomi et al. Proteome analysis of tissues by mass spectrometry.[J]. Mass Spectrom Rev, 2019, 38: 403-441.

[2] Gillette Michael A,Carr Steven A,Quantitative analysis of peptides and proteins in biomedicine by targeted mass spectrometry.[J].Nat Methods, 2013, 10: 28-34.

[3] Shabihkhani Maryam,Lucey Gregory M,Wei Bowen et al. The procurement, storage, and quality assurance of frozen blood and tissue biospecimens in pathology, biorepository, and biobank settings.[J].Clin Biochem, 2014, 47: 258-66.

[4] Lygirou Vasiliki ,Makridakis Manousos, Vlahou Antonia, Biological sample collection for clinical proteomics: existing SOPs.[J].Methods Mol Biol, 2015, 1243: 3-27.