Countstar Altair全自動(dòng)細(xì)胞分析儀在細(xì)胞培養(yǎng)疫苗過(guò)程中的應(yīng)用

一、疫苗的概述
1.什么是疫苗？
 一切通過(guò)注射和黏膜途徑接種，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)特定致病原的特異性抗體或細(xì)胞免疫，從而使機(jī)體獲得保護(hù)或消滅該致病原能力的生物制品，統(tǒng)稱為疫苗。
包括：蛋白質(zhì)、多糖、核酸、活載體或感染因子等。
2.疫苗的分類和發(fā)展有哪些？

• 按所用材料分類：

      細(xì)菌性疫苗
      病毒性疫苗
      類毒素

• 按疫苗研制技術(shù)分類

      傳統(tǒng)疫苗：滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗（用天然微生物的某些成分制成）
      新型疫苗：基因工程亞單位疫苗、基因工程載體疫苗（活疫苗）、核酸疫苗、基因缺失疫苗、重組疫苗、合成肽疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗。

• 疫苗的發(fā)展：

      晶典的病毒疫苗和細(xì)菌疫苗→寄生蟲疫苗、腫瘤疫苗、避孕疫苗等；
      預(yù)防性疫苗→治療性疫苗

• 疫苗的基本成分：抗原，佐劑，防腐劑，穩(wěn)定劑，滅活劑，緩沖液、鹽類等非活性成分

表1.不同疫苗特點(diǎn)

	滅活疫苗	減毒活疫苗	亞單位疫苗
獲得方法	用化學(xué)或物理方法將病原體殺死，但讓保持其免疫原性	通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物傳種接代的方法將強(qiáng)毒致弱，使毒力降低，但仍保持其免疫原性	以化學(xué)方法獲得病原體的某些具有免疫原性的成分，接種后刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫效果
接種特點(diǎn)	穩(wěn)定性好，比較安全，一般要接種2-3次，反應(yīng)比較大，維持時(shí)間較短	穩(wěn)定性較差，也存在毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)，但接種次數(shù)少，反應(yīng)小，免疫效果持久	純度較高，副反應(yīng)小，需多次接種
常見(jiàn)疫苗	霍亂，百日咳，傷寒，脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗等	麻疹，鼠疫，卡介苗，脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗等	白喉、破傷風(fēng)類毒素，A群腦膜炎球菌多糖疫苗

表2.不同年齡階段常見(jiàn)接種疫苗情況

年齡段	接種疫苗
兒童	脊髓灰質(zhì)炎，甲肝，肺炎，結(jié)核，麻腮風(fēng)-水痘，百白破-乙肝-流感桿菌-滅活脊灰炎，輪狀病毒，腦膜炎等。
青少年	乙肝-甲肝，百白破，巨噬病毒，艾滋病，衣原體，人乳頭瘤病毒，EB病毒，單純孢疹等。
成年	乙肝-甲肝，百白破，巨噬病毒，艾滋病，單純孢疹，結(jié)核，幽門螺桿菌等。
老年人	流感，呼吸道合胞病毒，肺炎，帶狀孢疹等。

二、細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的制備工藝
細(xì)胞培養(yǎng)疫苗有細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗和細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗，前者多以強(qiáng)毒毒株培養(yǎng)增殖制造，后者則用弱病毒毒株增殖生產(chǎn)。
其基本流程是：細(xì)胞制備→病毒接種→病毒收獲→病毒滅活→合并、濃縮、純化→檢定→分裝及凍干。 在工藝控制過(guò)程中，要根據(jù)生物反應(yīng)器的工作體積，確定合適的細(xì)胞密度。接種到反應(yīng)器后的細(xì)胞密度一定要合適，密度過(guò)高，容易導(dǎo)致基質(zhì)不均勻，細(xì)胞生長(zhǎng)不同步，凋亡快；密度過(guò)低，空間利用率低，細(xì)胞生長(zhǎng)到一定規(guī)模需要更長(zhǎng)的時(shí)間，難以保證細(xì)胞代次。
 
三、Countstar Altair全自動(dòng)細(xì)胞分析儀在疫苗行業(yè)中的應(yīng)用
細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的整個(gè)過(guò)程中，都需要對(duì)細(xì)胞的濃度和活率進(jìn)行質(zhì)控，如細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、種子擴(kuò)增時(shí)，都要確定細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度和活性，以計(jì)數(shù)傳代比例。Countstar Altair全自動(dòng)細(xì)胞分析儀利用臺(tái)盼藍(lán)排斥方法，結(jié)合先進(jìn)的光學(xué)成像技術(shù)和智能圖像識(shí)別技術(shù)，一步操作即可獲得細(xì)胞總數(shù)，濃度，活率，直徑，結(jié)團(tuán)率等信息。Countstar Altair適用于工業(yè)生產(chǎn)，采用一體機(jī)設(shè)計(jì)，無(wú)需外接電腦，其軟件數(shù)據(jù)管理和控制性能完全符合FDA CFR 21 Part11，同時(shí)提供完整的IQ/OQ/PQ驗(yàn)證方案及文件，滿足現(xiàn)代生物制藥工業(yè)的需求，應(yīng)用在工業(yè)開發(fā)、工業(yè)生產(chǎn)、質(zhì)量控制等多方面。 它的核心優(yōu)點(diǎn)有：
1.一體機(jī)設(shè)置，操作智能化
（1）全觸屏，APP操作平臺(tái)，三步完成，讓你輕松檢測(cè)細(xì)胞樣品。如圖4
（2）同時(shí)可檢測(cè)五個(gè)樣品，每個(gè)樣品自動(dòng)采集三個(gè)視野并算出平均值，快速而便捷，如圖5.1和5.2。
  （3）多種數(shù)據(jù)導(dǎo)出格式，包括JPEG、EXCEL、PDF等格式，根據(jù)實(shí)際需要導(dǎo)出各類結(jié)果，滿足不同的目的，如圖6.1、6.2和6.3。 （4）可以繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，如圖7
2.測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性
Countstar Altair 對(duì)光學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行了優(yōu)化并獨(dú)創(chuàng)“定焦”設(shè)計(jì)，避免手動(dòng)調(diào)焦可能帶來(lái)的測(cè)量數(shù)值變化；大樣本采樣量有效地減少了統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差，保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確；儀器與儀器之間，細(xì)胞計(jì)數(shù)板與計(jì)數(shù)板之間，CV值＜5%，如圖8.1、8.2和8.3。
3. 儀器本身的合規(guī)性
（1）符合FDA 21 CFR Part11法規(guī)，有多級(jí)權(quán)限管理和電子簽名等功能，如圖9.1和9.2。 （2）滿足GMP規(guī)定，可以提供IQ、OQ、PQ驗(yàn)證服務(wù)
Countstar產(chǎn)品是免維護(hù)的儀器，可以定期通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)顆粒對(duì)儀器的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性進(jìn)行校準(zhǔn)，我們提供8種顆粒，包含3種濃度顆粒，3種活率顆粒以及2種直徑顆粒，可以完成對(duì)儀器全方位的校準(zhǔn)以及驗(yàn)證，確保儀器的性能符合要求，如圖10。

  4.網(wǎng)絡(luò)連接，中央數(shù)據(jù)管理
Countstar Altair可以連接網(wǎng)絡(luò)，與服務(wù)器對(duì)接，實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)上傳，進(jìn)行中央數(shù)據(jù)的管理，如圖11.1和圖11.2。
  小結(jié)
在疫苗行業(yè)中，摸索細(xì)胞的培養(yǎng)條件、改進(jìn)培養(yǎng)工藝是細(xì)胞制藥研發(fā)的重要階段，Countstar Altair全自動(dòng)細(xì)胞分析儀能夠快速檢測(cè)細(xì)胞的濃度、活率、直徑等，并提供高清的細(xì)胞圖片，為改進(jìn)細(xì)胞的培養(yǎng)工藝提供可靠的數(shù)據(jù)支持。Countstar Altair符合cGMP法規(guī)，能夠準(zhǔn)確有效地檢測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)，保證疫苗的產(chǎn)量和質(zhì)量。