高通量PCR/qPCR體系構(gòu)建新方法和新應(yīng)用

PCR/qPCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于各種分子生物學檢測領(lǐng)域。疫情之下，高通量的PCR檢測需求日趨上升，為了解決手工移液操作的失誤風險和操作難度，SPT Labtech公司的mosquito和dragonfly discovery液體工作站以超高精度的液體處理能力配合檢測試劑盒的優(yōu)秀性能，可以將PCR技術(shù)應(yīng)用到更高密度的檢測模式中，適應(yīng)如今的檢測需求和通量。

mosquito LV 25 to 1200 nL	mosquito HV 500 nL to 5 mL	dragonfly 200 nL to 4 mL

 
一、移液精準可重復(fù)性高
在PCR和qPCR加樣過程中，尤其在配置96孔或者384孔反應(yīng)板時，采用高通量高精度的自動化移液系統(tǒng)來進行實驗體系構(gòu)建，可以避免在高壓工作下人工疲勞操作帶來的不均一性，減小實驗誤差，并提高樣本處理效率。
mosquito和dragonfly discovery獨有的固相置換技術(shù)，可以無視液體粘度和表面張力進行精準加樣，對于不同的液體如PEG、乙醇或gDNA都無需調(diào)整液體參數(shù)，在1uL加樣下，CV值<3%。  
二、用更少的試劑樣本做更多實驗
PCR實驗體系的微縮化可以幫助研究人員降低試劑使用的成本。更重要的是，對于一些珍貴樣本（比如來自患者的臨床樣本，或者樣本庫的存檔樣本），它們往往具有很高的臨床價值但是總量非常稀少，實驗體系的微縮化能有效節(jié)省樣本用量，使得這些樣本可以進行多次分析。
使用mosquito和dragonfly discovery進行PCR、qPCR體系建立，可以將常規(guī)的反應(yīng)體積從25μL降低至2μL，并且對實驗結(jié)果沒有任何影響。  
三、快速制備反應(yīng)體系
mosquito和dragonfly discovery移液速度非常快。使用mosquito進行一塊384孔板的移液只需要3分鐘，使用dragonfly discovery進行一塊384孔板的試劑分液只需要30秒。并且軟件操作界面簡潔友好，操作十分簡便。  
1、應(yīng)用案例1
由于mosquito和dragonfly discovery的小體系加樣非常精準，可以輕松地將常規(guī)PCR體系從40μL微縮化到了2uL，同時保證了實驗結(jié)果的靈敏度和特異性。 2、應(yīng)用案例2
分別使用mosquito LV、mosquito HV、dragonfly discovery制備qPCR反應(yīng)體系(KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix (2X) Universal)。實驗結(jié)果表明，在反應(yīng)體系減少15倍的情況下，依然獲得了精確且重復(fù)性高的結(jié)果。 對于mosquito HV，單獨添加每種試劑成功將化體系微縮化至1.5μL (下圖A, Ct=20.90; CV=0.2)，預(yù)混試劑后加樣成功微縮化至1μL (下圖B,Ct=25.68; CV=0.7)。對于mosquito LV，不論單獨添加每種試劑或預(yù)混后加樣，均將總體系降低至0.6μL (下圖C, Ct=18.04; CV=1.7; 下圖D, Ct=25.44;CV=0.9)。使用dragonfly discovery建立微縮化qPCR體系，單獨添加每種試劑時總體系為0.8μL (下圖E, Ct=18.27; CV=1.5)，預(yù)混試劑加樣時總體系為0.6μL (下圖F, Ct=25.92; CV=0.8)。 3、應(yīng)用案例3
馬里蘭大學基因組學服務(wù)實驗室使用CDC推薦的COVID-19檢測方法，搭配SPT Labtech mosquito HV和dragonfly discovery液體處理工作站進行自動化qPCR體系建立，建立了大規(guī)�？焖贆z測平臺，為抗擊新冠肺炎疫情做出貢獻。每天可進行多達20000次檢測，極大地增加了檢測通量和效率。  
使用mosquito和dragonfly discovery進行微縮化、自動化的PCR體系建立，相比于手工移液操作，具有極大的優(yōu)勢：
▪ 提高實驗通量（在384孔板中建立PCR反應(yīng)體系，日檢測通量達到20000個/天）
▪ 減少樣本和試劑用量從而節(jié)約成本（微縮化PCR/qPCR體系至2μL）
▪ 提高流程的標準化和可重復(fù)性（減少人為操作帶來的實驗誤差）
▪ 一次性耗材有效降低交叉污染風險（槍頭經(jīng)過除酶滅菌處理）
▪ 工作站體積小巧易于整合（可整合機械臂、大型工作站、層流罩）