miR-29b-3p通過調節(jié)機械刺激骨細胞的IGF-1分泌來調節(jié)成骨細胞的分化

機械刺激在骨骼的代謝平衡中起著至關重要的作用。生理負荷可誘導骨形成，而負荷不足或負荷過大則會導致骨吸收。

作為骨組織中的主要細胞，骨細胞對機械刺激作出反應，感知機械刺激并將其整合到生化信號中，以調節(jié)骨形成和骨吸收。以往的研究主要集中在骨細胞對流體剪切應力的反應，然而，骨細胞如何將機械刺激轉化為生物信號并調節(jié)骨形成（成骨細胞的活性）或骨吸收（破骨細胞的活性）仍未完全闡明。

MiRs 是一種小的非編碼單鏈 RNA。先前已發(fā)現(xiàn) miR 在骨形成中起關鍵作用，并且已鑒定出許多調節(jié)骨形成的 miRs 。然而，在骨細胞中，尚未確定有哪些 miRs 對機械應變有反應，并且尚未完全了解機械反應性 miRs 如何調節(jié)成骨細胞分化。

以此為切入點，來自山東省生物物理重點實驗室、廣西桂林醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程系、德州市第二人民醫(yī)院內科等單位的專家學者進行了深入研究，在 Cellular & Molecular Biology Letters 上發(fā)表了題為《miR-29b-3p regulated osteoblast differentiation via regulating IGF-1 secretion of mechanically stimulated osteocytes》的研究論文。

該團隊之前的研究證實，在 0.5Hz下，機械拉伸強度為2500 με，持續(xù)8小時，可促進成骨細胞的骨形成，并發(fā)現(xiàn)了機械反應性miRs。這促使研究人員進一步研究骨細胞對機械拉伸應變的反應，并尋找骨細胞的機械反應性 miRs。

miR-29b 調節(jié)成骨細胞分化（在 MC3T3 成骨細胞中，miR-29b 過表達促進成骨分化），并且證實 IGF-1 是 miR-29b 的靶基因。因此，研究人員推測 miR-29b 對施加于骨細胞的機械應變有反應，并參與成骨細胞分化。然而，miR-29b骨細胞將機械信號轉化為生物信號并調節(jié)成骨細胞分化的機制尚未完全闡明。

該實驗研究了骨細胞對 0.5Hz 下 2500 με 機械拉伸應變 8 小時后的生物學反應，并選擇了一些新的機械敏感 miRs。此外，還研究了 miR-29b 參與骨細胞對機械應變和成骨細胞分化的反應。

實驗首先研究了骨細胞對 0.5Hz、2500 με 的生理機械拉伸應變 8 小時的反應。如圖1所示， 對MLO-Y4細胞施加機械拉伸應變后，IGF-1和PGE2的ELISA結果、OPG的蛋白質印跡和NOS活性的生化檢測結果都發(fā)生了變化。這四個因素在骨形成中都起著重要作用。
 

接下來，實驗篩選并驗證了10個 miRs 對應用于 MLO-Y4 細胞的機械拉伸應變的響應。通過miR微陣列篩選，共有40個miRs出現(xiàn)差異表達。然后，使用 qPCR 進一步驗證了 這40 個 miRs。結果確定了10個機械響應的 miRs：與正常組相比，其中8個上調，而 miR-29b-3p 和 miR-361-3p 下調。（圖2 A）
 

應用生物信息學來預測這些不同表達的 miRs 的靶基因。結果表明，多個靶基因與骨形成相關。其中，IGF-1 最引人注意，在之前的研究中，機械應變骨細胞中IGF-1的表達水平升高（圖1），而miR-29b-3p的表達水平降低（圖2 A），表明 miR-29b-3p 可能通過靶向 IGF-1 來調節(jié)骨形成。

最后，繼續(xù)研究 miR-29b-3p 在骨細胞對機械應變反應中的作用以及 miR 對成骨細胞分化的影響。實驗發(fā)現(xiàn)，施加機械牽張力下調 MLO-Y4 細胞而不是MC3T3-E1細胞中 miR-29b-3p 的表達，而且 miR-29b-3p 抑制骨細胞IGF-1的分泌（圖2 C）。

miR-29b-3p 模擬物轉染導致 MLO-Y4 細胞中 miR 過表達，導致骨細胞培養(yǎng)上清液中 IGF-1 水平降低，而 miR-29b-3p 抑制劑轉染導致miR-29B-3P的低表達，而且增加了IGF-1的分泌（圖2 B）。

這些結果表明 miR-29b-3p 通過骨細胞分泌調節(jié)成骨細胞分化。
 

總之，該研究發(fā)現(xiàn)骨細胞對2500 με、0.5 Hz、8 h的循環(huán)機械拉伸應變有反應；在骨細胞中發(fā)現(xiàn)了機械反應miRs；miR-29b-3p對機械拉伸應變有反應；miR通過調節(jié)骨細胞IGF-1的分泌來調節(jié)成骨細胞的分化。

據報道，骨細胞對流體剪切應力、微重力和流體流動有反應。該研究結果表明，骨細胞也可以通過 miR-29b-3p 調控 IGF-1 的分泌來響應機械拉伸應變，調控成骨細胞分化，這將為骨細胞調控骨形成提供一些線索。

參考文獻：Zeng Q, Wang Y, Gao J, Yan Z, Li Z, Zou X, Li Y, Wang J, Guo Y. miR-29b-3p regulated osteoblast differentiation via regulating IGF-1 secretion of mechanically stimulated osteocytes. Cell Mol Biol Lett. 2019 Mar 14;24:11. doi: 10.1186/s11658-019-0136-2. PMID: 30915127; PMCID: PMC6416934.

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