可視細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的操作方法

在本方案中，我們將用于兩種不同細(xì)胞類型的共培養(yǎng)。供體細(xì)胞和受體細(xì)胞可以單獨(dú)生長(zhǎng)，但共享相同的培養(yǎng)基以通過(guò)可溶性因子/蛋白質(zhì)進(jìn)行通訊。

共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)流程

1.打開μ-Slide2孔共培養(yǎng)載玻片的包裝，并將其放在μ-Slide架子或其他合適的表面上。準(zhǔn)備您的受體細(xì)胞，并使用40-60μl細(xì)胞懸液將其接種到中央小孔中。根據(jù)您的細(xì)胞，我們建議5-10x104cell/ml。

2.準(zhǔn)備您的供體細(xì)胞，并將其接種到外部小孔中，每孔使用40-60μl細(xì)胞懸液。當(dāng)使用ibiTreat（經(jīng)過(guò)親水性組織培養(yǎng)處理）表面時(shí)，外部8個(gè)孔之間可能會(huì)發(fā)生一些混合。不要用培養(yǎng)基潤(rùn)濕內(nèi)孔的走道，并小心處理玻片，以免在細(xì)胞附著之前混合培養(yǎng)基。

3.細(xì)胞附著后，清空各個(gè)孔溶液以防止細(xì)胞混合。用40-60μl培養(yǎng)基洗滌9個(gè)小孔，以去除非貼壁細(xì)胞。之后，將400-600μl培養(yǎng)基填充到每個(gè)大孔中。這將連接9個(gè)小孔，從而允許兩種細(xì)胞通過(guò)培養(yǎng)基進(jìn)行通訊。

μ-Slide2孔共培養(yǎng)載玻片還允許在凝膠基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞球體，并與接種在外孔中的供體細(xì)胞結(jié)合。在下面的圖片中，有一個(gè)多細(xì)胞球狀體，例如內(nèi)皮細(xì)胞嵌入膠原蛋白凝膠中。在中心小孔中生長(zhǎng)的球狀體可以在癌細(xì)胞附近培養(yǎng)，這些癌細(xì)胞可以釋放出可溶性因子。像膠原I型凝膠這樣的水性3D凝膠基質(zhì)不會(huì)阻礙分子擴(kuò)散。

與ibidiCulture-Insert2孔一起進(jìn)行2D共培養(yǎng)，ibidiCulture-Insert2孔可用于將不同類型的細(xì)胞鋪到一個(gè)培養(yǎng)容器中，彼此相鄰。它僅用作在指定區(qū)域播種細(xì)胞的模具。去除培養(yǎng)插件后，不同的細(xì)胞類型會(huì)彼此緊鄰而無(wú)障礙地生長(zhǎng)。

μ-Slide共培養(yǎng)，可以創(chuàng)建單個(gè)細(xì)胞模式。根據(jù)所使用的板或培養(yǎng)皿，可以單獨(dú)選擇細(xì)胞數(shù)量和培養(yǎng)基體積。

在3D矩陣中共同培養(yǎng)細(xì)胞

ibidimicro-Insert4孔提供了小孔，可以填充混合到3D凝膠基質(zhì)中的細(xì)胞。這樣，可以在共享一個(gè)液體的同時(shí)分別培養(yǎng)不同類型的懸浮或貼壁細(xì)胞�？梢愿鶕�(jù)需要收集或交換，而無(wú)需將細(xì)胞沖洗出凝膠。