研究級(jí)顯微鏡選型中的核心因素
瀏覽次數(shù):930 發(fā)布日期:2022-3-30
來源:明美
光學(xué)顯微鏡是生命科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室的核心設(shè)備之一,它被應(yīng)用于不同領(lǐng)域,揭示不同科學(xué)問題。本文結(jié)合顯微鏡的特點(diǎn),總結(jié)選擇合適的研究級(jí)顯微鏡時(shí)應(yīng)該考慮的核心因素。
使用什么樣的標(biāo)本?
選擇研究級(jí)顯微鏡時(shí)需考慮的一件事是想探索的樣品類型。對(duì)于安裝在一片薄的玻璃片上的固定樣品,可以使用正置顯微鏡。
活細(xì)胞需要不一樣的顯微鏡。培養(yǎng)細(xì)胞需要在相對(duì)較大、充滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器里生存,物鏡需在樣品下方,并采用長(zhǎng)工作距離設(shè)計(jì),以保障物鏡不會(huì)因?yàn)檫_(dá)不到工作距離而無法觀察貼壁和懸浮的細(xì)胞、組織,對(duì)應(yīng)地,聚光鏡需要在樣品上方,這種結(jié)構(gòu)就是倒置顯微鏡。
左:在載玻片上放置固定樣品,例如:組織切片
右:培養(yǎng)活細(xì)胞用的培養(yǎng)皿
圖2:左:正置的顯微鏡的特色是物鏡在樣本是上方,聚光鏡在樣本下方。
右:在倒置顯微鏡下這個(gè)組裝被逆轉(zhuǎn)以給用戶更多的空間增加物鏡對(duì)樣本的親近性。
哪種對(duì)比法適合你的樣品?
大多數(shù)細(xì)胞呈透明狀,對(duì)比度低,難分辨細(xì)節(jié)。研究人員需使用各種對(duì)比增強(qiáng)方法來觀察。既可以用相差對(duì)比度(PH)和微分干涉對(duì)比度(DIC)操縱穿過樣本的光來添加對(duì)比度,也可用DAPI等熒光染料進(jìn)行染色添加對(duì)比。
根據(jù)對(duì)比的方法,顯微鏡需要特定的設(shè)備,如相差需要相稱環(huán)和PH物鏡;熒光顯微鏡需要特殊的激發(fā)塊,以允許正確的光波長(zhǎng)度進(jìn)出標(biāo)本。
用不同對(duì)比方法拍攝的神經(jīng)元系列。從左到右:明場(chǎng),DIC,相稱,熒光
要怎樣的光源?
對(duì)比方法的選擇也決定了用什么光源。用于常規(guī)明場(chǎng)顯微鏡學(xué)的透射光照明,鹵素?zé)艉蚅ED照明,可支持相襯和DIC。熒光觀察需要光譜覆蓋較寬的熒光光源,比如LED熒光光源或者汞燈,氙燈,或者鹵素?zé),LED熒光光源因?yàn)閴勖L(zhǎng),方便易用,已經(jīng)成為新時(shí)代主流。
是否要將結(jié)果文件化或者發(fā)布結(jié)果?
如果你想拍攝做活細(xì)胞成像,你需要一個(gè)數(shù)碼顯微鏡相機(jī)。特別是在熒光活細(xì)胞成像的情況下,建議用一個(gè)靈敏的的相機(jī),以盡量減少會(huì)損害細(xì)胞的激發(fā)光的總量。如明美背照式科學(xué)級(jí)sCMOS相機(jī)MSH12-BI,結(jié)合了高速率、寬動(dòng)態(tài)范圍的能力,在材料和生命科學(xué)中廣泛應(yīng)用,如弱光成像、熒光成像、光譜成像、近紅外NIR成像等領(lǐng)域。
背照式科學(xué)級(jí)sCMOS相機(jī)MSH12-BI
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