小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞的應(yīng)用

一、背景

　　P815小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞源自DBA/2小鼠的肥大細(xì)胞瘤；P815細(xì)胞可吞噬乳膠微球，但不吞噬酵母聚糖或卡介苗；P815細(xì)胞沒有抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。硫酸右旋糖酐、LPS或PPD不能抑制P815細(xì)胞生長(zhǎng)；P815細(xì)胞產(chǎn)生溶菌酶，鼠痘病毒陰性。

　　細(xì)胞接收后的處理：

　　1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

　　2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度�？醇�(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

　　3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

　　4）貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

　　5）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

　　二、應(yīng)用

　　用于小鼠肥大細(xì)胞瘤P815細(xì)胞誘導(dǎo)BALB/c鼠產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)研究：

　　采用小鼠肥大細(xì)胞瘤P815細(xì)胞作為抗原皮下免疫BALB/c小鼠,探討其是否可誘導(dǎo)BALB/c小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的、針對(duì)P815細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答,為腫瘤疫苗設(shè)計(jì)篩查抗原提供基礎(chǔ)。

　　方法：小鼠肥大細(xì)胞瘤P815細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入BALB/c小鼠,實(shí)驗(yàn)按每只小鼠注入細(xì)胞數(shù)分為1×107/只組、5×106/只組、2.5×106/只組、1×106/只組、5×105/只組、1×105/只組和溶劑（RPM11640培養(yǎng)液）對(duì)照組,每組6只小鼠。觀察各組小鼠的生存狀態(tài)、體重及肝肺脾（重量、形態(tài)、病理）、血涂片、骨髓涂片、白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)變化。

　　皮下注入P815細(xì)胞對(duì)BALB/c小鼠形成肥大細(xì)胞瘤/白血病的影響實(shí)驗(yàn)分為4組,即P815細(xì)胞組、米托蒽醌處理的P815細(xì)胞組、L1210細(xì)胞組、溶劑對(duì)照組,每組6只BALB/c小鼠,分別于雙側(cè)臀部皮下注入P815細(xì)胞懸液（PBS液配制,0.5ml/只,細(xì)胞數(shù)5×106/只）、0.1ug/ml米托蒽醌作用12小時(shí)的P815細(xì)胞懸液（PBS液配制,0.5ml/只,細(xì)胞數(shù)5×106/只）、L1210細(xì)胞懸液（PBS液配制,0.5ml/只,細(xì)胞數(shù)5×106/只）和PBS液0.5ml/只。一周后,4組小鼠均尾靜脈注入P815細(xì)胞懸液1.5×106/只（RPMI1640培養(yǎng)基配制,0.15ml/只）。觀察各組小鼠生存時(shí)間、血涂片、體重及肝肺脾變化,評(píng)定各組小鼠形成肥大細(xì)胞瘤/白血病情況（觀察期限為尾靜脈注入P815細(xì)胞后3個(gè)月）。

　　皮下注入P815細(xì)胞誘導(dǎo)BALB/c鼠產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)實(shí)驗(yàn)分為2組。隨機(jī)抽取尾靜脈注入P815細(xì)胞后未死亡的BALB/c小鼠3只設(shè)為實(shí)驗(yàn)組,新購買的3只BALB/c小鼠設(shè)為對(duì)照組。對(duì)照組小鼠雙側(cè)臀部皮下注入0.5mlPBS液一周后,和實(shí)驗(yàn)組小鼠一起,頸椎脫臼法處死。無菌取脾臟,制備脾細(xì)胞懸液。乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)兩組小鼠脾細(xì)胞分別對(duì)P815細(xì)胞、L1210細(xì)胞的殺傷率。觀察兩組小鼠脾細(xì)胞對(duì)P815細(xì)胞克隆形成的影響。實(shí)驗(yàn)各重復(fù)3次。

　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組小鼠體重、肝脾肺重、白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)采用單向方差分析比較,方差齊時(shí)用LSD法行多重比較,方差不齊時(shí)用校正F值的Welch法檢驗(yàn)及DunnettT3法行多重比較。各組小鼠生存時(shí)間用Kaplan-Meier法行生存分析。兩組脾細(xì)胞對(duì)P815細(xì)胞、L1210細(xì)胞的殺傷率和克隆影響采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和兩因素兩水平析因設(shè)計(jì)資料的方差分析進(jìn)行比較。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。