植物淀粉含量試劑盒使用說明書

 
注    意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
淀粉是植物中糖的主要儲存形式，其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。
 
測定原理：
利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量，即可計算淀粉含量。
 
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
 
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體105mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；
 
淀粉提�。� 

• 稱取0.1~0.2g新鮮樣本（建議稱取約0.1g新鮮樣本）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀。
• 沉淀中加入0.5mL蒸餾水，放入95℃水浴中糊化15min（蓋緊，以防止水分散失）。
• 冷卻后，加入0.35mL試劑二，25℃常溫提取15min，振蕩3-5次。
• 加入0.85mL蒸餾水，混勻，3000g，25℃離心10min，取上清液待測。

注意：如樣本為淀粉含量較高的干樣，為保證充分提取，可適當減小取樣量，如稱取0.01g~0.02g干樣，加入1mL試劑一，其余提取步驟同上。
 
測定步驟：

• 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至620nm，蒸餾水調零。
• 調節(jié)水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入3.75mL蒸餾水后，緩慢加入21.25mL濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、樣本測定：取50μL樣本和250μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A。
 
淀粉含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 5.872x - 0.0295；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g
 
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 2.936x - 0.0295；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g
 
注意：由于工作液具有強腐蝕性，請謹慎操作。
若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計算公式中乘以相應的稀釋倍數(shù)。
提取液的配置：0.35mL試劑二+1.35mL水。用多少按照此比例配多少。
最低檢測限為10μg/g鮮重或100ng/mgprot。