河豚毒素ELISA試劑盒使用說明書
河豚毒素ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書
貨號(hào)：Ounuo97001
貨號(hào)：Ounuo97001
本品采用競(jìng)爭性酶免檢測(cè)技術(shù)用于鲀魚類肌肉、肝臟、皮膚等樣本中河豚毒素的定量分析，最大可滿足96次測(cè)試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測(cè)42個(gè)樣本。
產(chǎn)品特性：
快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法
高靈敏度（1.5μg/kg,或ppb）和檢測(cè)限低（30μg/kg，或ppb）
快速，檢測(cè)時(shí)間＜1.5h
高的重現(xiàn)性
檢測(cè)限：
魚肉、肝臟、魚皮：30μg/kg
定量限：
魚肉、肝臟、魚皮：50μg/kg
一、使用須知：
- 當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時(shí)，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因?yàn)閮x器方法僅測(cè)量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識(shí)別目標(biāo)分子且還能識(shí)別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對(duì)數(shù)據(jù)做出合理的分析。
- 任何試劑、檢測(cè)程序的改變都可能導(dǎo)致檢測(cè)失敗。
- 不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。
- 實(shí)驗(yàn)用水的質(zhì)量很重要，請(qǐng)使用蒸餾水或去離子水。
- 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個(gè)月內(nèi)使用完。
酶標(biāo)儀：配備450nm波長
單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
多道移液器：30-300μL量程一支
白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干
恒溫培養(yǎng)箱
恒溫培養(yǎng)箱
均質(zhì)器或絞肉機(jī)
恒溫水浴鍋
甲醇，分析純
乙酸，分析純
三、樣本前處理：一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，如長時(shí)間不用，建議分裝成適量小份于-20或-80℃保存，請(qǐng)勿使用反復(fù)凍融的樣本。【注釋：廢棄的陽性樣本應(yīng)作為有毒廢棄物處理】
準(zhǔn)備
(1) 樣本提取液
分別量取甲醇40mL、蒸餾水60mL、冰乙酸0.1mL混勻。
(2) 1×樣本稀釋液
按1份體積4×樣本稀釋液和3份體積的蒸餾水混勻。
魚肉、肝臟、魚皮
(1) 稱取2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋30s;
(2) 放置于90℃水浴中10min，期間手搖樣本3次；
(3) 自來水降溫1min，加入1mL正己烷渦旋30s；4000rpm，離心5min；
(4) 取中間層清液100μL，加入300μL 1×樣本稀釋液混勻，取50μL點(diǎn)樣
稀釋倍數(shù)：20
四、檢測(cè)步驟
四、檢測(cè)步驟
檢測(cè)前準(zhǔn)備
所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
檢測(cè)開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；
取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；
未使用完的試劑請(qǐng)勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
請(qǐng)不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測(cè)，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測(cè)失�。�
標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。
檢測(cè)前準(zhǔn)備
所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
檢測(cè)開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；
取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；
未使用完的試劑請(qǐng)勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
請(qǐng)不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測(cè)，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測(cè)失敗；
標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制
取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測(cè)步驟
(1) 移取50μL河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；
(2) 移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；
(3) 移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；
(4) 加入50μL河豚毒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；
(5) 室溫（20-25℃）孵育30min；
(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；
(7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育15min;
(8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)
五、結(jié)果計(jì)算
（1）以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。
其中公式如下
logit(B/B0)=k ln〖(concentration)+c〗①
B為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對(duì)應(yīng)的吸光度；
B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
K為斜率；
C為截距
（2）計(jì)算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測(cè)物最終濃度
六、產(chǎn)品組成
六、產(chǎn)品組成
| 組分 | 數(shù)量 | 組分 | 數(shù)量 | |
| 預(yù)包被微孔板 | 96孔（8孔*12條） | 河豚毒素抗體 | 6mL | |
| 河 豚 毒 素 標(biāo) 準(zhǔn) 品 |
0 | 1mL | 酶結(jié)合物 | 6mL |
| 1.5ng/mL | 1mL | 4×樣本稀釋液 | 12mL | |
| 4.5ng/mL | 1mL | 20 x 洗液 | 30mL | |
| 13.5ng/mL | 1mL | 終止液 | 12mL | |
| 40.5ng/mL | 1mL | 底物（含TMB） | 12mL | |
| 說明書/質(zhì)控報(bào)告 | 各1份 | |||
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