細(xì)胞不貼壁的原因和解決方法

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中容易出現(xiàn)這樣或那樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題都是在細(xì)胞生長(zhǎng)方面來(lái)說(shuō)，比如細(xì)胞的不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，這些問(wèn)題使得細(xì)胞研究者很是頭疼，下面是針對(duì)這些問(wèn)題的原因和解決方法：

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁

可能原因：

1.胰蛋白酶消化過(guò)度；

2.支原體污染；

3.培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；

4.細(xì)胞老化；

5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

解決方法：

1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；

2.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

3.使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2；

4.啟用新的保種細(xì)胞；

5.調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

二、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因：

1.培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子；

2.支原體污染；

3.蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解；

4.DNA污染。

解決方法：

1.用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

2.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體；

3.用DNaseI處理細(xì)胞。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

可能原因：

1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

2.培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞；

3.培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；

4.試劑保存不當(dāng)；

5.接種細(xì)胞起始濃度太低；

6.細(xì)胞已老化；

7.支原體污染。

解決方法：

1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；

2.換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子；

3.用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

1.增加接種細(xì)胞起始濃度；

2.換用新的保種細(xì)胞；

3.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好

可能原因：

1.細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；

細(xì)胞的接種量：接種量過(guò)低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；

細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)；

胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短：時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞死亡；時(shí)間過(guò)短，細(xì)胞未完全分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

2.污染

支原體污染；

霉菌污染。

3.培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證；

選擇的培養(yǎng)基是否合適；

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤。

4.培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對(duì)性的解決方案

1.注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；

2.避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；

3.要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；

4.注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。

五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因：

1.培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2；

2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；

3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；

4.培養(yǎng)液滲透壓不正確；

5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。

解決方法：

1.檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

3.取新的保存細(xì)胞種；

4.檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓；

5.換入新鮮培養(yǎng)液。