WB/ELISA/IHC/FC實(shí)驗(yàn)指南：如何選擇合適的對(duì)照劑和封閉劑？

你是否遇到過(guò)以下幾種難題，IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，背景高；多標(biāo)記免疫組化實(shí)驗(yàn)中一抗種屬來(lái)源相同時(shí)，不知該如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；IP/Co-IP后的WB實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)非特異性條帶；流式實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有合適的直標(biāo)一抗......你是否知道通過(guò)選擇正確的對(duì)照劑和封閉劑，可以幫助你解決這些實(shí)驗(yàn)中遇到的難題，且更容易獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本文將給大家?guī)��?lái)流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、WB、ELISA、IHC幾大實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題，及解決辦法。

流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（Flow Cytometry）

Western Blotting實(shí)驗(yàn)

ELISA實(shí)驗(yàn)

關(guān)于使用牛血清白蛋白(BSA)和牛奶作為封閉劑的Tips：
BSA和dry milk有時(shí)含有牛的IgG。除了Jackson提供的牛來(lái)源抗山羊IgG的二抗外，許多其他的如抗牛、抗山羊和抗綿羊的二抗都會(huì)與牛的IgG發(fā)生反應(yīng)。因此，使用BSA或dry milk進(jìn)行阻斷或稀釋會(huì)顯著增加背景并降低抗體效價(jià)。使用與二抗種屬來(lái)源一致的標(biāo)準(zhǔn)血清(5% v/v)來(lái)進(jìn)行阻斷是更好的選擇。

免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫試劑
上文中提到的能夠幫助解決實(shí)驗(yàn)里出現(xiàn)的問(wèn)題的免疫試劑介紹如下：

·  標(biāo)準(zhǔn)血清（Normal Serums）
標(biāo)準(zhǔn)血清來(lái)自未產(chǎn)生免疫反應(yīng)的動(dòng)物，因此不會(huì)檢測(cè)到任何特異性抗原。在PBS(或類(lèi)似的緩沖液)中稀釋到5% (v/v)的標(biāo)準(zhǔn)血清被強(qiáng)烈推薦作為阻斷劑，以減少非特異性、保守序列和/或fc受體結(jié)合的背景。最好的結(jié)果是使用稀釋的來(lái)自同一宿主的正常血清作為標(biāo)記抗體，在加入一抗之前作為單獨(dú)的孵育步驟。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

·  從標(biāo)準(zhǔn)血清中提取的ChromPure™純化蛋白（ChromPure™ Purified Proteins from Normal Serums）
ChromPure™蛋白主要用作一抗或二抗的實(shí)驗(yàn)對(duì)照。它們也可用作Western blotting, IHC和IF的阻斷試劑。ChromPure™蛋白來(lái)源于未免疫動(dòng)物的血清，不識(shí)別任何已知的抗原。它們是使用各種色譜技術(shù)制備的，以產(chǎn)生無(wú)污染分子觀察到的濃度高達(dá)20 mg/ml的材料，使它們成為最敏感的測(cè)定的實(shí)驗(yàn)對(duì)照的理想選擇。ChromPure™蛋白可用于許多物種的各種格式，包括全免疫球蛋白，F(xiàn)(ab’)2和Fab片段。

人IgM、血清IgA和其他蛋白質(zhì)也可用。Jackson為該產(chǎn)品線提供了廣泛的偶聯(lián)物，包括一系列熒光染料和示蹤酶，允許從非特異性相互作用中分辨出信號(hào)。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

·  單價(jià)Fab片段親和純化抗體
親和純化抗體fab片段可用于阻斷內(nèi)源性免疫球蛋白以減少背景染色和雙標(biāo)記來(lái)自同一宿主物種的主抗體。下面的例子展示了在小鼠組織上使用小鼠一抗時(shí)，如何使用Fab片段阻斷內(nèi)源性免疫球蛋白。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

·  牛血清蛋白（無(wú)IgG，無(wú)蛋白酶）
牛血清白蛋白(BSA)被廣泛用作稀釋抗體的載體蛋白，并在免疫測(cè)定和免疫檢測(cè)方案中作為一種常用的蛋白質(zhì)阻斷劑。如果牛血清蛋白是您的試驗(yàn)所需的稀釋劑或阻斷劑，那么使用適合此目的的牛血清蛋白是很重要的。

牛IgG與山羊、綿羊和馬的IgG有許多共同的表位，可以成為針對(duì)這些物種的二抗的靶點(diǎn)(牛抗山羊IgG除外)。這也可能發(fā)生在與牛IgG有交叉反應(yīng)的其他抗體上。這些相互作用可能導(dǎo)致抗體活性的損失和/或背景增加。這些背景的產(chǎn)生可能來(lái)自于粘稠可溶性免疫復(fù)合物，或來(lái)自于因牛IgG蛋白的污染而產(chǎn)生的非特異性交叉反應(yīng)。