免疫組化技術(shù)專題第6期：染色顯色液配置及相關(guān)注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù)：2066　發(fā)布日期：2022-12-27　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

當(dāng)免疫組化染色實(shí)驗(yàn)操作到了顯色操作環(huán)節(jié)，說明之前環(huán)節(jié)的工作開展都比較順暢，也因此我們就更不能在染色顯色操作環(huán)節(jié)出現(xiàn)任何失誤，否則可能前功盡棄；同時，顯色液的污染還存在較大的健康安全隱患。本期就和大家一起交流染色顯色液配置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

顯色液配置順序

在配置顯色液之前，必須應(yīng)嚴(yán)格按照說明書的配置順序操作，一般的配制順序是先加蒸餾水，然后加緩沖液，接著是底物H2O2，最后才添加 DAB 顯色劑。
記得要校正蒸餾水pH濃度(pH=7.0)，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。若出現(xiàn)沉淀，要先進(jìn)行過濾操作后才能使用。
同時注意現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)配現(xiàn)用。配制好的溶液要避光存放，20 min內(nèi)有效。另外配制順序錯誤也會影響顯色效果。

控制顯色時間

在做染色操作前，充分觀察常規(guī)切片和HE染色情況，盡可能找出陽性內(nèi)對照部位。顯色時，一定要在顯微鏡下控制染色的深淺，以內(nèi)對照部位出現(xiàn)稍濃于目的色的時間為該片的顯色時間。
如果無陽性對照，可選擇切片內(nèi)的紅細(xì)胞(RBC)為片內(nèi)對照，一般紅細(xì)胞（RBC）略微變色即可。
因?yàn)椴煌目贵w、組織、氣溫、水質(zhì)等因素都會對顯色帶來影響，所以顯色時間的控制尤為重要，同時具備陽性對照最好。
顯色時間可控制在5~15min。如果實(shí)驗(yàn)室室溫較高，時間需要縮短；室溫較低，則需要延長，但注意不能超過15min，不然容易導(dǎo)致背景上色。

避免顯色劑污染

DAB顯色劑具有致癌隱患，這個問題必須重視，避免污染技術(shù)人員、其他人員、科室和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。

工具專用

因?yàn)镈AB顯色劑會污染，具有致癌隱患，所以配制過程中要注意污染隱患。但為了切實(shí)切斷污染源頭，顯色操作所使用的器皿和顯微鏡要作為專用設(shè)備工具。在觀察時DAB難免污染顯微鏡，特別是滴染顯色常帶著顯色液觀察，如不專用極易對他人造成污染，并且每次使用完畢的器皿和顯微鏡要擦洗干凈和復(fù)位。