熒光原位雜交技術(shù)原理及應(yīng)用

瀏覽次數(shù)：1369　發(fā)布日期：2023-3-21　來源：自然基因

熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)原理是將熒光素直接或間接標(biāo)記的核酸探針[或生物素、地高辛、dinit rophenyl（I）NP）、aminoacetylAAFfluorine（AAF）等標(biāo)記的核酸探針與待測樣本中的核酸序列按照堿基互補(bǔ)配對的原則進(jìn)行雜交，經(jīng)洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。

熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)，原理是利用報告分子（如生物素、地高辛等）標(biāo)記核酸探針，然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交，若兩者同源互補(bǔ)，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。

熒光原位雜交技術(shù)優(yōu)點(diǎn)
熒光原位雜交與其他原位雜交技術(shù)相比，熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn)，主要體現(xiàn)在：

①FISH不需要放射性同位素標(biāo)記，更經(jīng)濟(jì)安全。

②FISH的實(shí)驗(yàn)周期短，探針穩(wěn)定性高，特異性好，定位準(zhǔn)確，能迅速得到結(jié)果。

③FISH通過多次免疫化學(xué)反應(yīng)，使雜交信號增強(qiáng)，靈敏度提高，其靈敏度與放射性探針相當(dāng)。

④多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列。

⑤熒光原位雜交既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。

熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用
熒光原位雜交技術(shù)在基因定性、定量，整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于遺傳病診斷、病毒感染分析、產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組研究等許多領(lǐng)域，在臨床檢驗(yàn)、教學(xué)和研究等方面扮演著重要的角色。

基因（或DNA片段）染色體定位和基因圖譜繪制

熒光原位雜交目前應(yīng)用的基因定位的主要方法是FISH。分離到的DNA序列直接通過FISH,同時采用多種顏色熒光素的標(biāo)記探針，結(jié)合中期染色體和間期細(xì)胞方面的信息，可快速確定一-系列DNA序列之間的相互次序和距離，完成基因制圖。用不同顏色炎光索標(biāo)記2個不同的DNA鏈，而且他們在染色體上的距離大于1Mbp時，可以依據(jù)不同探針信號的排列關(guān)系分辨他們在染色體上的順序。

若采用5-溴脫氧尿嘧啶（ 5-Burd ）處理細(xì)胞，能夠獲得高分辨顯帶的染色體，提高DNA鏈標(biāo)記到染色體上的分班能力。如使用間期細(xì)胞，2個DNA鏈的距離可以縮短至50kb,這個間距是染色體上分辨距離的1/20,不同探針的次序可以通過測量間期細(xì)胞的距離來確定。確定DNA鏈在染色體上的精細(xì)位置適用于檢在某些特殊的染色休易位和缺失。標(biāo)記同一-DNA鏈與不同種屬細(xì)胞的染色體雜交，可以找出不同種屬之間的同源基因以及基因在染色體上的位置，從而了解種屬之間的進(jìn)化關(guān)系。

IMSTAR是Françoise Soussaline博士于1985年創(chuàng)立于法國巴黎，致力于發(fā)展圖像學(xué)分析設(shè)備，上世紀(jì)90年代初開始全面研發(fā)智能全自動臨床圖像分析設(shè)備，目前已經(jīng)發(fā)展到第六代產(chǎn)品，是世界上最為先進(jìn)的臨床圖像設(shè)備之一，也是全球唯一的可以實(shí)現(xiàn)智能全自動分析的系統(tǒng)，在生命科學(xué)智能圖像分析系統(tǒng)領(lǐng)域處于絕對領(lǐng)導(dǎo)地位已經(jīng)長達(dá)10年。

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