顯微鏡用于流感病毒的檢測

流感的檢測與預(yù)防：顯微鏡也有一份功勞

今年的甲型流感可謂來勢洶洶，不僅患者癥狀較重，而且學(xué)生群體感染比例相當(dāng)高，有些中小學(xué)甚至到了無法正常線下教學(xué)的程度，流感的有效檢測和預(yù)防，又再成為關(guān)注焦點，悄悄告訴大家，顯微鏡在這里面可是有重要角色的。

 

一、認(rèn)識流感病毒

 

流感病毒（Influenza）根據(jù)病毒核蛋白和基質(zhì)蛋白，可分為甲乙丙�。ˋBCD）四型，其中對人造成比較大威脅的是甲型（Influenza A）和乙型（Influenza B），對免疫力低下的人群都可能造成致命后果，尤其甲型流感，殺傷力通常比乙型流感更強。
  甲型流感按血凝素HA和神經(jīng)氨酸酶NA的蛋白結(jié)構(gòu)和基因型進(jìn)行分型，于是就有了H1N1流感、H3N2流感等分型命名。乙型流感則分為Victoria系和Yamagata系。

我們常看到新聞報道H1N1之類禽流感，就屬于甲型流感。甲型流感可以感染禽類、豬、馬、海豹、鯨魚、水貂等動物，如果H5N1等禽流感、豬流感突然變異成能夠感染人，那往往會帶來嚴(yán)重后果，因為這樣的病原體對人體免疫系統(tǒng)來說是很陌生的，難以應(yīng)對。

二、如何檢測是否感染流感

按2020版的流行性感冒診療方案，以臨床表現(xiàn)（癥狀）結(jié)合一種或以上的病原學(xué)檢測結(jié)果陽性，來判斷確診流感。病原學(xué)檢測主要分抗原檢測、核酸檢測、培養(yǎng)分離和血清學(xué)檢查四種，其中常用的是前面兩種。
  核酸檢測大家不陌生，就是拭子采樣然后用PCR檢測�？乖瓩z測大家是否還記得？我們在家就能自己做的那種膠金體檢測就屬于抗原檢測，膠金體抗原檢測屬于低靈敏度檢測，有時候可能檢測不出陽性。
  在醫(yī)院等醫(yī)療機構(gòu)，我們有更高靈敏度、高特異性的抗原檢測方法，免疫熒光法，比如體現(xiàn)為呼吸道七聯(lián)檢或者呼吸道九聯(lián)檢，使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察判斷。
  顧名思義，呼吸道七聯(lián)檢/九聯(lián)檢是一次同時檢測七種/九種呼吸道病原體，以更快速判斷呼吸道感染情況，其中兩個孔位包括甲型流感和乙型流感。
  使用熒光顯微鏡400倍視野觀察（40X物鏡），甲型流感檢測孔位熒光少且弱，視為陰性結(jié)果，熒光亮度強數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞大于3-5個，就可以判斷為陽性。乙型流感另有一個孔位，判斷標(biāo)準(zhǔn)和甲型流感一致。
  免疫熒光法檢測快速，而且準(zhǔn)確性高于膠金體法，因此得到越來越多醫(yī)療機構(gòu)的選擇。

三、流感病毒如何預(yù)防

預(yù)防流感病毒，首先當(dāng)然還是提倡勤洗手多通風(fēng)，然而就是盡量接種疫苗，尤其是以下高危人群：5歲以下兒童、65歲及以上老人、肥胖者、妊娠及圍產(chǎn)期婦女，以及有慢性呼吸系統(tǒng)疾病等基礎(chǔ)疾病的人。
  目前國內(nèi)流感疫苗主要有三類，三價滅活（IIV3）、四價滅活（IIV4）和三價減毒活疫苗（LAIV3），都能為甲型流感H1N1、H3N1和乙型流感Victoria系提供保護(hù)，四價滅活還能額外保護(hù)乙型流感Yamagata系。
  那么流感疫苗是怎么制作的呢？首先和很多其他滅活疫苗一樣，有細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)裂解疫苗工藝。
  裂解疫苗使用細(xì)胞培養(yǎng)增殖病毒，再通過裂解，去除大分子蛋白和病毒核酸，僅保留有較高免疫原性的血凝素HA和神經(jīng)氨酸酶NA等蛋白，形成裂解疫苗，這個過程中會使用倒置顯微鏡對細(xì)胞培養(yǎng)的情況進(jìn)行觀察。
  另一種工藝就比較魔性了，用雞蛋培養(yǎng)。這些雞蛋看起來跟我們買的雞蛋差不多，但又不是一般雞蛋，它們?nèi)�是高潔凈度的SPF受精蛋，里面是有雞胚胎的。
  上一年兩種流感的基因會在雞蛋清中自然混合，形成適合使用的新流感品種，每個雞蛋可以做出一劑或幾劑疫苗。這個工藝把雞蛋當(dāng)成生物反應(yīng)器用，好處是設(shè)備要求低，因此起步成本低，壞處是生產(chǎn)周期長、產(chǎn)能提升難、以及病毒錯配失效等問題，比如今年禽流感疫情大大影響雞蛋價格，這種方式就不靈了，這推動了更多企業(yè)要轉(zhuǎn)向細(xì)胞培養(yǎng)方式。 總結(jié)：流感不僅是一種古老的疾病，還是一種講長期存在、不太可能消失的疾病，對于老人小孩和慢性疾病患者，還是接種疫苗進(jìn)行保護(hù)好，無論選擇三價滅活、四價滅活還是三價減毒，都能為比較高危險的甲型流感提供保護(hù)，所以是值得投入的。

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