客戶案例：多發(fā)性骨髓瘤研究中的新突破（一）

多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）是一種常見于中老年人血液系統(tǒng)漿細胞惡性腫瘤，隨著我國人口老齡化不斷增長，MM發(fā)病率呈明顯上升趨勢。當(dāng)前MM重要臨床問題是耐藥所誘導(dǎo)的復(fù)發(fā)難治。因此，深入研究MM發(fā)病和耐藥機制成為探索新的診療方法的重要策略。

2022年7月，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院周文教授課題組在Nature Communications（IF=17.694）期刊上在線發(fā)表了題為“Blocking glycine utilization inhibits multiple myeloma progression by disrupting glutathione balance” 的論文。該研究發(fā)現(xiàn)了骨髓微環(huán)境中氨基酸代謝失衡是MM發(fā)病和耐藥的新機制，提示從代謝角度干預(yù)氨基酸來源、攝取和分解可為MM治療提供新思路。（麥特繪譜為本研究提供非靶向代謝組、Q300全定量代謝組和代謝流（13C2-Glycine）檢測服務(wù)；另外，麥特繪譜創(chuàng)始人/香港浸會大學(xué)賈偉教授作為共同作者之一參與本項研究）

臨床代謝組學(xué)分析

研究人員首先對來自健康志愿者（HD）和多發(fā)性骨髓瘤患者（MM）的外周血（PB）血漿和骨髓（BM）液進行非靶向代謝組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)與健康人相比，MM患者的氨基酸上調(diào)，脂肪酸下調(diào)；篩選到10個差異代謝物（VIP>1，F(xiàn)C>1.2，p<0.05），包括甘氨酸、L-脯氨酸、肌酐、鳥氨酸、L-谷氨酸、L-纈氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、巖芹酸和亞油酸。其中甘氨酸在PB血漿和BM中VIP值最大。進而靶向代謝組學(xué)（Q300全定量代謝組）證實MM患者的BM和PB血漿中甘氨酸濃度均顯著升高。ROC分析顯示BM和PB血漿中的甘氨酸可有效區(qū)分新診斷的MM患者和HD健康者，曲線下面積（AUC）分別為1和0.94。關(guān)聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn)甘氨酸濃度與MM臨床特征（漿細胞百分比、DS階段、免疫球蛋白亞型和貧血）之間具有相關(guān)性，提示甘氨酸與MM患者不良預(yù)后和惡性進展有關(guān)。

圖1. 甘氨酸與MM患者不良預(yù)后相關(guān)

體外體內(nèi)實驗證實甘氨酸剝奪抑制骨髓瘤細胞增殖

與正常細胞相比，研究者在MM細胞系中觀察到甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白溶質(zhì)載體(SLC6A6/9)的上調(diào)，因此猜測MM細胞相對于正常對照細胞從環(huán)境中吸收了更多的甘氨酸。接下來，研究人員分別通過細胞和小鼠實驗，分別給細胞有/無甘氨酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)，以及給小鼠有/無甘氨酸的飲食飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)無論在體內(nèi)還是體外，去除外源性甘氨酸均可顯著抑制MM腫瘤細胞的增殖，減緩腫瘤進展，無甘氨酸飲食也可以減輕小鼠的骨損傷程度。

為探索甘氨酸代謝與骨損傷的關(guān)聯(lián)，進一步通過代謝流（13C2-Glycine）分析發(fā)現(xiàn)，ARP1和5TGM1細胞系中外源甘氨酸代謝衍生的谷胱甘肽（GSH）有助于促進MM細胞增殖，而無甘氨酸喂養(yǎng)異種移植MM小鼠無論是腫瘤大小還是GSH水平均顯著低于正常飲食小鼠。這些結(jié)果說明，外源甘氨酸的缺乏通過破壞骨髓瘤細胞內(nèi)谷胱甘肽的平衡來抑制增殖。

圖2. 甘氨酸衍生的谷胱甘肽GSH促進MM細胞增殖

抑制GLDC可抑制MM細胞的增殖

甘氨酸裂解體系（GCS）主要由幾種蛋白質(zhì)組成，包括甘氨酸脫氫酶（GLDC）、GCS蛋白H（GCSH）、氨甲基轉(zhuǎn)移酶（AMT）和二氫硫辛酰胺脫氫酶（DLD）。研究人員發(fā)現(xiàn)外源性甘氨酸剝奪降低了MM細胞中NADH/NAD+的比率，表明外源甘氨酸可以被該系統(tǒng)裂解。RNA測序數(shù)據(jù)顯示外源甘氨酸缺失導(dǎo)致GLDC下調(diào)。為了確定GLDC是否在MM中起作用，敲低MM細胞中GLDC蛋白，發(fā)現(xiàn)細胞增殖被抑制，GSH水平降低，并且NADH/NAD+的比值降低，說明抑制甘氨酸脫氫酶GLDC可抑制MM細胞增殖。

甘氨酸的來源及其在MM耐藥中的作用

臨床中發(fā)現(xiàn)由MM細胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP13（靶向軟骨降解的主要酶）介導(dǎo)的骨膠原降解，進而增加MM患者的甘氨酸水平。接下來的檢測發(fā)現(xiàn)，與新診斷的患者相比，復(fù)發(fā)患者的甘氨酸濃度低得多，但葡萄糖濃度相似。ROC曲線分析表明甘氨酸可能有助于區(qū)分復(fù)發(fā)和新診斷的MM患者。另外，實驗發(fā)現(xiàn)添加甘氨酸增加了ARP1細胞對治療藥物硼替佐米（BTZ）的抗性，敲低SLC6A9或甜菜堿處理可阻斷MM細胞對甘氨酸的利用，阻礙其增殖并增強硼替佐米對MM細胞效應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)提示甘氨酸缺失可能增強BTZ對MM細胞的敏感性和藥效，阻斷甘氨酸攝取抑制細胞增殖并增強BTZ對骨髓瘤細胞的作用可能成為一種很有前景的MM治療策略。

圖3. 由MM細胞分泌的MMP13介導(dǎo)的骨膠原降解，增加MM患者的甘氨酸水平

因此，本研究確定了甘氨酸是MM的關(guān)鍵代謝調(diào)節(jié)劑，揭示了MM進展的分子機制，提示通過阻斷甘氨酸攝取抑制細胞增殖并增強BTZ對骨髓瘤細胞的作用，可能成為一種很有前景的MM治療策略。

參考文獻

Xia, J., Zhang, J., Wu, X. et al. Blocking glycine utilization inhibits multiple myeloma progression by disrupting glutathione balance. Nat Commun. 2022.

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上述研究涉及的非靶向代謝組學(xué)、靶向代謝組學(xué)（氨基酸譜、Q300全定量代謝組）和代謝流分析均由麥特繪譜提供檢測服務(wù)。截至2023年5月，我們已協(xié)助客戶與合作伙伴發(fā)表SCI文章300+篇，累計影響因子3000+，包括Science, Cell Metabolism, Immunity, Gut, Signal Transduction and Targeted Therapy, Science Translational Medicine等頂級期刊。

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