生物材料在生物實(shí)驗(yàn)中的功能驗(yàn)證方法

材料生物學(xué)也是常規(guī)科研工作者會(huì)碰到的課題，由于研究人員需要了解支架的功能，將體外人工合成支架材料植入到動(dòng)物內(nèi)，了解支架作用，比如促進(jìn)骨頭愈合、促進(jìn)肌腱愈合等，因此相關(guān)科研工作者也需要在細(xì)胞和小動(dòng)物體內(nèi)探究創(chuàng)新性材料的生物學(xué)作用和毒性，下面給大家介紹一下常見的生物材料體外和體內(nèi)驗(yàn)證功能的基礎(chǔ)方案，僅供相關(guān)科研工作者參考。
 
1、材料對(duì)成骨樣MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）粘附及增殖活性的影響
（1）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)1h
（2）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)6h
（3）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)12h
（4）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)24h
（5）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)48h
實(shí)驗(yàn)1 ：MTT/CCK8檢測(cè)材料表面附著的成骨細(xì)胞的數(shù)量或者增值情況；
實(shí)驗(yàn)2：掃描電鏡檢測(cè)細(xì)胞在材料表面的情況；
實(shí)驗(yàn)3：鬼筆環(huán)肽染色檢測(cè)材料表面的細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)情況；
實(shí)驗(yàn)4：活死染色檢測(cè)檢測(cè)材料表面的成骨細(xì)胞活死情況；
 
2、材料對(duì)成骨樣MG63細(xì)胞分化潛能影響的檢測(cè)（1）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)1d
（2）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)7d
（3）MG63細(xì)胞/骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（成骨誘導(dǎo)）+材料，培養(yǎng)14d
實(shí)驗(yàn)1：檢測(cè)材料對(duì)血MG63細(xì)胞中ALP活性檢測(cè)；
實(shí)驗(yàn)2：茜素紅染色檢測(cè)材料對(duì)成骨誘導(dǎo)的影響；
實(shí)驗(yàn)3：QPCR檢測(cè)材料對(duì)成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物的表達(dá)量影響；
實(shí)驗(yàn)4：ELISA檢測(cè)材料對(duì)成骨細(xì)胞分泌蛋白的影響；
 
3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證材料對(duì)成骨的影響和效果；（1）兔子正常組
（2）兔子缺損植入組（根據(jù)材料的特征和作用選擇缺損部位植入部位）
植入后4周、8周、12周時(shí)處死取材（根據(jù)材料的作用特征選擇處死時(shí)間），取植入材料以及周邊組織，進(jìn)行下列檢測(cè)：
（1）HE和masson染色觀察材料周邊組織的形態(tài)變化以及愈合情況；
（2）免疫組化或者免疫熒光檢測(cè)：材料和周邊組織中檢測(cè)分化指標(biāo)的表達(dá)量情況；
（3）QPCR和WB：檢測(cè)材料周邊組織中關(guān)鍵的成骨指標(biāo)或者其他關(guān)鍵指標(biāo)的表達(dá)情況。
 

• 相關(guān)部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果例圖：

4、參考文獻(xiàn)
[1] 章篩林.人工關(guān)節(jié)假體陰極弧沉積氧化鋯膜對(duì)成骨細(xì)胞生物活性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].蘇州大學(xué),2013.DOI:10.7666/d.D336777.
[2] 朱禮偉.溫敏膠原負(fù)載TGF-β3填充3D打印微孔支架促進(jìn)腱-骨愈合的研究[D].吉林大學(xué),2022.