腦缺血再灌注模型實驗介紹（MCAO模型）

缺血性腦血管病(ICVD)是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，是中老年人的常見病，具有發(fā)病率、死亡率、致殘率、復(fù)發(fā)率高的特點，是目前重點防治的一種疾病。目前科研工作者通過在動物上復(fù)刻這種疾病，方便研究藥物的治療效果或者發(fā)病機(jī)制更方便。目前常見的大鼠模型是腦缺血再灌注（MCAO）模型，下面對這個模型的建立以及后續(xù)的機(jī)制研究方案做一些介紹，供各位科研工作者參考。
 
1.實驗動物：取適應(yīng)性飼養(yǎng)一周的健康SD大鼠，雌雄均可
2.術(shù)前器械及物品準(zhǔn)備（所有物品消毒備用）
1）干棉球，酒精棉球
2) 碘伏＋棉簽
3）小動物麻醉機(jī)
4) 常規(guī)手術(shù)器械
5) 顯微手術(shù)器械
6）縫合包
7）小動物呼吸機(jī)
8）6-0帶線縫合針
3.麻醉：麻醉前將呼吸機(jī)進(jìn)氣口連接麻醉機(jī)出氣口。大鼠在小動物麻醉機(jī)箱體內(nèi)預(yù)麻醉；
4.預(yù)麻醉后將大鼠以仰臥位固定在解剖板上，戴好麻醉機(jī)面罩，頸中部備皮，消毒；
5.沿頸部正中切開皮膚，鈍性分離皮下組織，在分離過程中會看到頜下腺，將腺體輕輕推到一側(cè)，分離到氣管前肌后，沿右側(cè)胸鎖乳突肌腱向下分離，見到頸動脈鞘后可用拉鉤將皮膚肌肉固定好。此時可見到頸總動脈，小心向頭側(cè)跟心側(cè)剝離勁動脈跟其隨行的神經(jīng)，注意動作要輕，不要損傷神經(jīng)；
6.剝離到頭側(cè)約0.5cm時可以看到頸總動脈分成頸內(nèi)動脈跟頸外動脈，繼續(xù)剝離2根血管跟神經(jīng)，此時用預(yù)先準(zhǔn)備好的血管夾夾閉頸總動脈（盡量靠心端），準(zhǔn)備好的一根絲線結(jié)扎死頸外動脈（盡量遠(yuǎn)離分叉處），另外一根套在頸外動脈（接近分叉處）打活結(jié)備用。用血管夾夾閉頸內(nèi)動脈；
7.將大鼠手術(shù)部位移至體視鏡下，用顯微剪在頸外動脈上斜行剪一個小口，用顯微鑷夾起MCAO線拴從血管上的小口穿入血管，穿到分叉處時輕輕提起結(jié)扎頸外動脈的絲線，待線拴進(jìn)入頸內(nèi)動脈，稍微拉緊之前打活結(jié)的絲線，松開血管夾，繼續(xù)向里面推送線拴，插入至顱內(nèi)微感阻力時拉緊活結(jié)；
8.缺血90分鐘后，拔出線栓，把活結(jié)扎死。縫合肌肉跟皮膚。并進(jìn)行尾靜脈注射，24h后取材。
 
目前實驗室較多采用MCA阻斷0min、90min和120min的短暫腦缺血-再灌注模型，研究多種藥物對MCAO的治療效果和分子機(jī)制，取材后檢測TTC判斷造模情況以及大鼠神經(jīng)功能評分；
 
常規(guī)研究MCAO模型的動物分組方法如下：

1. 假手術(shù)組
2. MCAO模型組
3. MCAO模型組+給藥組
4. MCAO模型組+SIRNA組（腺相關(guān)病毒注射）

 
一般給藥方式可以為：灌胃、尾靜脈注射、腹腔注射等；可以根據(jù)試劑的情況調(diào)整給藥頻次和方式；甚至也可以先給藥幾天以后再造模也可以；
另外一種腺相關(guān)病毒注射：目的是為了在動物體內(nèi)讓某種蛋白表達(dá)量上升或者下降，用于研究相關(guān)分子機(jī)制的；
 
模型結(jié)束后取樣檢測，進(jìn)行藥物治療效果評估以及可能相關(guān)的分子機(jī)制。

1. TTC檢測；
2. QPCR檢測；
3. WB檢測；
4. 神經(jīng)功能評分；
5. 行為學(xué)檢測：比如平行木實驗、爬繩實驗等；
6. 組學(xué)檢測