如何提升關(guān)鍵應(yīng)用場(chǎng)景下的連續(xù)稀釋可靠性

連續(xù)稀釋法是全球無(wú)數(shù)實(shí)驗(yàn)室都在使用的核心技術(shù)之一，但眾所周知，這項(xiàng)工作既耗時(shí)又費(fèi)力，并且容易出錯(cuò)，結(jié)果經(jīng)常不準(zhǔn)確且容易造成重復(fù)性勞損（RSI）。我們的電動(dòng)移液器、自動(dòng)化平臺(tái)和蠕動(dòng)泵是提高連續(xù)稀釋可重復(fù)性和優(yōu)化最終結(jié)果可靠性的完美解決方案。
 
 
精準(zhǔn)移液獲得可靠結(jié)果
 
連續(xù)稀釋通常被用于估計(jì)DNA、RNA、PCR產(chǎn)物、蛋白質(zhì)或微生物樣品的濃度。另外，這也是獲得所需的試劑、化學(xué)品或化合物濃度的重要方法，例如藥物學(xué)領(lǐng)域中的新藥發(fā)現(xiàn)。一般而言，連續(xù)稀釋往往看似輕而易舉，但在手動(dòng)液體處理過(guò)程中，移液速度、角度和混合上的細(xì)微差異很容易使誤差在整個(gè)工作流程中不斷累積，進(jìn)而對(duì)最終結(jié)果的可靠性產(chǎn)生負(fù)面影響。不僅如此，手動(dòng)移液操作較慢，大大拉長(zhǎng)了獲得結(jié)果的時(shí)間，而且長(zhǎng)期忍受別扭的姿勢(shì)、笨重的移液器、僵硬的柱塞按鈕和高度重復(fù)的處理過(guò)程都可能會(huì)導(dǎo)致手部、肩部、頸部以及腕部的重復(fù)性勞損。
 
事實(shí)證明，我們的移液解決方案可以提高通量和最終結(jié)果的準(zhǔn)確性，廣泛適用于眾多學(xué)科領(lǐng)域。得益于更快捷的多通道液體轉(zhuǎn)移操作，它們縮短了需要操作者握持或保持不舒適坐姿或站姿的時(shí)長(zhǎng)，進(jìn)而降低了造成RSI的風(fēng)險(xiǎn)。除此之外，人體工程學(xué)體驗(yàn)始終貫穿于INTEGRA手持式電動(dòng)移液器的開(kāi)發(fā)，它們重量輕，槍頭彈出力小，采用了直觀的拇指轉(zhuǎn)盤(pán)設(shè)計(jì)。使用自動(dòng)化移液器完全不需要執(zhí)行大量的手動(dòng)液體轉(zhuǎn)移步驟，減輕了手部和腕部的負(fù)擔(dān)。在此，我們列舉了三個(gè)關(guān)鍵應(yīng)用，這些多功能的產(chǎn)品在應(yīng)用中為簡(jiǎn)單、可重復(fù)的連續(xù)稀釋工作流程提供了支持。
 
如需了解連續(xù)稀釋的簡(jiǎn)單分步指南及實(shí)例、良好的移液操作以及針對(duì)特定液體的處理參數(shù)指南，請(qǐng)參閱以下文章：

• 如何進(jìn)行連續(xù)稀釋（包括計(jì)算）
• 掌握移液的藝術(shù)，并通過(guò)我們的綜合指南學(xué)習(xí)如何進(jìn)行連續(xù)稀釋

 
 
用于精確qPCR驗(yàn)證和核酸定量的高效標(biāo)準(zhǔn)曲線
 
標(biāo)準(zhǔn)曲線（也稱為校準(zhǔn)曲線）是一種定量研究和分析工具，用于確定未知樣品的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線是由待測(cè)分析物或與之密切相關(guān)的化合物在目標(biāo)濃度范圍內(nèi)制備的，并且通過(guò)分析多個(gè)已知濃度的樣品來(lái)驗(yàn)證。然后重復(fù)該過(guò)程，對(duì)未知樣品進(jìn)行測(cè)定，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出分析物的濃度。例如，核酸定量是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的工作流程，當(dāng)使用熒光法定量核酸時(shí)，可以通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣品的熒光測(cè)量值來(lái)確定DNA或RNA的含量。
 
詳細(xì)了解如何使用熒光測(cè)定法和其他RNA和DNA定量方法來(lái)確定核酸的濃度、產(chǎn)量和純度。
 
在構(gòu)建新方案或更改工作流程時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線還被用于驗(yàn)證qPCR檢測(cè)。使用含有已知量模板DNA的樣品進(jìn)行qPCR檢測(cè)，并將數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，以評(píng)估檢測(cè)的反應(yīng)效率。
 
了解qPCR的工作原理、如何使用標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證檢測(cè)以及qPCR數(shù)據(jù)分析的不同方法。

連續(xù)稀釋的可重復(fù)性對(duì)于確保結(jié)果的可靠性至關(guān)重要，借助搭載單通道VIAFLO輕型電動(dòng)移液器和D-ONE單通道移液模塊的ASSIST PLUS移液工作站，用戶可以預(yù)先設(shè)置移液速度和混合參數(shù)以保證每個(gè)稀釋步驟都將在相同的條件下進(jìn)行，不受操作員和批次的影響。這些移液器還可以在混合過(guò)程中進(jìn)行動(dòng)態(tài)體積調(diào)整，以實(shí)現(xiàn)最大限度的靈活性和過(guò)程優(yōu)化。如果需要并行制備多條標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以使用多通道VIAFLO移液器和VOYAGER可調(diào)槍頭間距移液器，VOYAGER還可以在源容器和目標(biāo)容器規(guī)格不同時(shí)直接進(jìn)行連續(xù)稀釋，減少液體轉(zhuǎn)移步驟的數(shù)量和出現(xiàn)手動(dòng)錯(cuò)誤的可能性。更少的液體處理步驟也意味著可以更快地完成連續(xù)稀釋，從而提高通量并縮短獲得結(jié)果的時(shí)間。
 
 
可重復(fù)的連續(xù)稀釋成就簡(jiǎn)單穩(wěn)妥的MIC測(cè)試
 
抗生素耐藥性可以通過(guò)病原體的隨機(jī)基因突變自然形成，但藥物的濫用和過(guò)度使用（尤其是醫(yī)療保健和農(nóng)業(yè)中的抗生素）會(huì)顯著加速這一過(guò)程。這意味著治療許多常見(jiàn)感染的可選項(xiàng)正在迅速減少，因此為了從一開(kāi)始就出具最有效的治療方案，進(jìn)行抗菌藥敏試驗(yàn)是至關(guān)重要的。這種測(cè)試也是在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中確定新型抗菌化合物功效的重要方法。
 
測(cè)量病原體對(duì)抗菌藥物敏感性的方法之一是測(cè)定可抑制其生長(zhǎng)的最低的抗菌藥物濃度，即最低抑菌濃度（MIC）。這可以通過(guò)肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法或抗菌梯度法進(jìn)行測(cè)定。點(diǎn)此瀏覽最常用MIC測(cè)定方法的全面綜述。
 
VIAFLO 96和VIAFLO 384手持式電動(dòng)移液器以及MINI 96便攜式電動(dòng)移液器的局部槍頭裝載允許用戶設(shè)置預(yù)定義的移液高度和角度。這些功能消除了手動(dòng)操作的影響并提高了MIC測(cè)試過(guò)程中液體處理步驟的一致性。VIAFLO 96和VIAFLO 384移液器還能讓實(shí)驗(yàn)室具備進(jìn)行更高產(chǎn)量的高通量連續(xù)稀釋的能力。
  局部裝載槍頭的MINI 96可提高連續(xù)稀釋的批次間和用戶間可重復(fù)性。
 
使用ASSIST PLUS移液工作站等自動(dòng)化液體處理解決方案，可以實(shí)現(xiàn)更復(fù)雜工作流程的高可重復(fù)性無(wú)人值守移液。該平臺(tái)可簡(jiǎn)化連續(xù)稀釋步驟以提高通量，并讓工作人員有時(shí)間執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室的其他重要任務(wù)，從而提高實(shí)驗(yàn)室的效率。最重要的是，該移液工作站能夠避免工作人員在液體轉(zhuǎn)移過(guò)程中暴露于有害生物和抗生素，從而確保人員安全，同時(shí)能夠消除由重復(fù)手動(dòng)移液引起的RSI。
 
我們的應(yīng)用紀(jì)要解釋了ASSIST PLUS移液工作站上經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的自動(dòng)連續(xù)稀釋流程，為尋求成熟液體處理方法來(lái)簡(jiǎn)化工作流程的實(shí)驗(yàn)室人員提供了寶貴的資源。了解如何通過(guò)在ASSIST PLUS上自動(dòng)執(zhí)行2倍、5倍和10倍連續(xù)稀釋的移液步驟來(lái)提高M(jìn)IC測(cè)試工作流程的速度和精度。
 
連續(xù)稀釋的液體處理階段可以在ASSIST PLUS上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，實(shí)現(xiàn)更高的通量和更好的一致性。
 
 
輕而易舉的細(xì)菌計(jì)數(shù)連續(xù)稀釋
 
連續(xù)稀釋也是微生物學(xué)領(lǐng)域的常用方法，用于估計(jì)樣品中包含的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量。當(dāng)然，當(dāng)它們以高濃度存在時(shí)，是不可能對(duì)單個(gè)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的，因此需要對(duì)樣品進(jìn)行10倍連續(xù)稀釋，再通過(guò)各級(jí)稀釋物的鋪板和孵育來(lái)估計(jì)樣品的細(xì)胞生長(zhǎng)模型。
 
相反，當(dāng)樣品中的細(xì)菌濃度非常低時(shí)，也無(wú)法通過(guò)經(jīng)典的平板計(jì)數(shù)法得出可靠的活細(xì)胞數(shù)。在這種情況下，應(yīng)改用最大可能性計(jì)數(shù)法（MPN）進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。將液體肉湯等分至培養(yǎng)管中，并接種不同數(shù)量的樣品，顏色變化則表明細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中管內(nèi)液體變得渾濁或有氣體產(chǎn)生。然后根據(jù)統(tǒng)計(jì)概率估計(jì)樣本中活細(xì)胞的數(shù)量。
 
DOSE IT實(shí)驗(yàn)室蠕動(dòng)泵可以快速準(zhǔn)確地將肉湯和樣品分配到培養(yǎng)管中，大大加快MPN流程的移液步驟�？蛇x配的桌面開(kāi)關(guān)或腳踏開(kāi)關(guān)可提供免手動(dòng)控制，通過(guò)PC軟件可進(jìn)行遠(yuǎn)程操作，為用戶提供更高的靈活性，使其能夠根據(jù)特定的MPN工作流程調(diào)整液體處理平臺(tái)。DOSE IT的CUSTOMIZE模式可以基于體積、流速和重復(fù)次數(shù)等可配置參數(shù)輕松創(chuàng)建個(gè)性化液體處理流程，確保樣品之間的可重復(fù)移液。該泵還可兼容1至8 mm內(nèi)不同尺寸的管路，以滿足不同的通量水平，這使其能夠在MPN分析過(guò)程中準(zhǔn)確地分配各種體積的樣品。
 
詳細(xì)了解DOSE IT如何在處理低濃度樣品時(shí)幫助快速完成精確的稀釋以進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。
 
DOSE IT在MPN工作流程中執(zhí)行高度準(zhǔn)確的免手動(dòng)培養(yǎng)基分配。
 
 
滿足需求的多功能解決方案
 
連續(xù)稀釋是一種在許多生命科學(xué)學(xué)科中都被廣泛使用的技術(shù)，而正確地執(zhí)行這種技術(shù)將為后續(xù)研究的成功奠定基礎(chǔ)。我們的液體處理解決方案可實(shí)現(xiàn)移液流程的標(biāo)準(zhǔn)化，并盡可能地減少手動(dòng)移液時(shí)經(jīng)常產(chǎn)生的人為錯(cuò)誤，從而提高結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。此外，這些創(chuàng)新且功能強(qiáng)大的產(chǎn)品可以大大加快連續(xù)稀釋的移液過(guò)程，使實(shí)驗(yàn)室能夠處理更多樣品并縮短獲得結(jié)果的時(shí)間。不僅如此，工作流程的自動(dòng)化和免手動(dòng)操作還可以避免實(shí)驗(yàn)室工作人員暴露于有害的樣品材料，且不必再執(zhí)行可能導(dǎo)致RSI的繁重移液任務(wù)，這是實(shí)驗(yàn)室管理人員的重要考量因素之一。我們高度靈活的儀器可以輕松適應(yīng)眾多不同的應(yīng)用，以簡(jiǎn)化各種液體處理工作流程并提高實(shí)驗(yàn)室效率。
 
 
參考文獻(xiàn)

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• https://www.thermofisher.com/ch/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/nucleic-acid-quantitation.html
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• https://microbiologynote.com/serial-dilution-method/
• https://conductscience.com/bacteria-enumeration/