外泌體及其實驗應(yīng)用方向介紹

外泌體介紹：
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)，所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中等。
人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。

外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：

一、是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而激活靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。

二、是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而激活細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。

三、是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。
針對外泌體中相關(guān)基因表達情況以及所參與的調(diào)控機制目前研究比較多，一般提取外泌體后均需要做WB、透射電鏡以及NTA等手段進行鑒定；
 
外泌體實驗的應(yīng)用：
（1）外泌體成分分析：可以通過質(zhì)譜、蛋白質(zhì)組學(xué)、核酸測序等技術(shù)對外泌體的成分進行分析，了解其包含的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等分子組成，從而揭示外泌體的功能和調(diào)控機制。
（2）信號傳遞研究：外泌體可以通過包裹的膜蛋白、miRNA、mRNA等分子向受體細胞傳遞信號�？梢岳�用提取的外泌體進行細胞實驗研究細胞間相互作用的機制，如細胞間的信號傳導(dǎo)、細胞增殖和分化等。
（3）疾病診斷與預(yù)測：外泌體中的蛋白質(zhì)、miRNA、DNA等分子可以作為潛在的生物標志物，用于疾病的早期診斷、預(yù)測和監(jiān)測。通過外泌體的分析，可以發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)的分子變化，為疾病的診斷和治療提供依據(jù)。
（4）腫瘤生物學(xué)研究：外泌體在腫瘤發(fā)生、進展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。可以利用外泌體進行腫瘤細胞間的信息傳遞研究，探索腫瘤細胞與腫瘤微環(huán)境之間的相互作用，為腫瘤的治療和預(yù)防提供新的靶點。
（5）藥物傳遞研究：外泌體可以作為一種潛在的藥物傳遞系統(tǒng)，將藥物封裝在外泌體中，通過外泌體傳遞到目標細胞，提高藥物的傳遞效率和藥效。可以研究外泌體的藥物傳遞機制，開發(fā)新的靶向藥物傳遞系統(tǒng)。
總的來說，外泌體具有廣泛的研究應(yīng)用，可以用于疾病診斷、疾病機制研究、信號傳遞研究、藥物傳遞等領(lǐng)域。
 
外泌體提取試劑盒步驟：
1.收集動物上清、血清、或者血漿，去除其他雜質(zhì)；
2.加入外泌體提取沉淀劑，每250ml樣本加入63ul沉淀劑，充分混勻后4℃靜置30min；
3.4℃下離心30min，棄去上清保留沉淀，加入100-500ul PBS溶解外泌體沉淀，-80℃保存；