Cocoon® Magsep 磁分選工藝使用指南與應(yīng)用案例分享

Lonza Cocoon® Platform 作為高靈活性，全封閉全自動化細(xì)胞治療生產(chǎn)平臺，目前已經(jīng)在全球范圍內(nèi)布局130臺，并有兩個項目進(jìn)入臨床II期，助力細(xì)胞治療產(chǎn)業(yè)化快速發(fā)展。
 

目前Cocoon® Platform已經(jīng)推出Cocoon® Platform 2.0并整合了磁分選模塊，進(jìn)一步加強(qiáng)了Cocoon®的全自動化流程。今天Lonza將為大家詳細(xì)介紹Cocoon®二代Magsep 磁選Protocol的使用指南。

01  安裝調(diào)試

· 房間需求：EU GMP Grade B/C，19℃-22℃

· 場地環(huán)境：高度約1.5米操作臺，長0.8米，寬1.2米，承重60kg，臺面光滑水平（Cocoon®需進(jìn)行水平校準(zhǔn)）

· 電力需求：100-240 VAC，50/60Hz，6 Amp（UPS電源最佳）

· 氣體準(zhǔn)備：CO2，終端管路CPC 5/32" I.D. x 1/4" O.D.

· 網(wǎng)絡(luò)接入

02  試劑耗材

03  工藝流程以及要點

Day0 細(xì)胞分選激活

包含步驟：

· Cocoon®外：PBMC分離，磁珠孵育

· Cocoon®內(nèi)：培養(yǎng)基添加，細(xì)胞分選，細(xì)胞激活培養(yǎng)

初始進(jìn)入細(xì)胞請使用純凈的已進(jìn)行磁珠孵育的PBMC，如使用手動人工分離的PBMC，可于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24h去除貼壁雜志細(xì)胞后方可進(jìn)入Cocoon®培養(yǎng)。

請按照磁珠供應(yīng)商推薦的工藝進(jìn)行磁珠孵育，強(qiáng)烈推薦磁珠細(xì)胞比例為1:1，過多的磁珠會導(dǎo)致細(xì)胞的過度激活以及后期磁珠殘留的增加。

Day1 細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)

包含步驟：pH校準(zhǔn)；病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

Cocoon®可以根據(jù)pH來自動調(diào)整艙體內(nèi)CO2的濃度，同時可以根據(jù)培養(yǎng)體系內(nèi)的溶解氧和pH來自動調(diào)整灌流速率來滿足不同客戶的需求。

Day2 病毒去除

包含步驟：病毒去除

培養(yǎng)室全換液以進(jìn)行病毒去除。

Day3-8 細(xì)胞培養(yǎng)

包含步驟：細(xì)胞培養(yǎng)；磁珠去除

分別于Day4，Day7進(jìn)行第一次以及第二次磁珠去除，強(qiáng)烈建議于Day4進(jìn)行第一次磁珠去除，過度的細(xì)胞激活會影響T細(xì)胞的亞群以及影響T細(xì)胞在Cocoon®培養(yǎng)室中的增殖。

Day9 細(xì)胞收獲

包含步驟：

· Cocoon®內(nèi)：磁珠去除，細(xì)胞收獲

· Cocoon®外：細(xì)胞洗滌，細(xì)胞凍存

于Day9進(jìn)行細(xì)胞收獲，進(jìn)行第三次磁珠去除并進(jìn)行洗滌收獲。

Cocoon®可以進(jìn)行洗滌，但是Cocoon®本身耗材不耐受DMSO，因此如需要在Cocoon®內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞洗滌分裝，請使用不含有DMSO的凍存液。

04  應(yīng)用案例

目前已有中國廣州以及新西蘭客戶使用Cocoon®進(jìn)行了TLR2 CAR T cells的臨床研究。

CAR結(jié)構(gòu)如下：
 

與手工生產(chǎn)數(shù)據(jù)相比，Cocoon®在病人和健康人間展現(xiàn)了更穩(wěn)定的陽性率：

同時，相較于手工工藝Cocoon®展現(xiàn)了更加穩(wěn)定的細(xì)胞產(chǎn)量和純度：

最后相較手工工藝也展現(xiàn)了類似的CD4/8細(xì)胞亞群：

一代Cocoon®與二代Cocoon®在細(xì)胞擴(kuò)增以及細(xì)胞活率方面沒有明顯差距：

Cocoon® Platform具有高度靈活性，能順利地幫客戶進(jìn)行手工工藝的轉(zhuǎn)移和放大生產(chǎn)工作，助力全球細(xì)胞治療產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

[參考文獻(xiàn)]

Cell & Gene Therapy Insights 2022; 8(1), 97–112

DOI: 10.18609/cgti.2022.027

Magnetic selection for consistent cellular starting material in autologous cell therapy manufacture