大小鼠采血方式尾尖采血、眼眶靜脈叢采血等的介紹及應(yīng)用場(chǎng)景
采血，是一個(gè)必備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能。根據(jù)采血的部位不同，大小鼠采血大致可以分為以下幾種方式：尾尖采血、眼眶靜脈叢采血、頜下靜脈采血、隱靜脈采血、心臟采血等。本期，小編就給大家系統(tǒng)性的盤點(diǎn)下大小鼠采血的相關(guān)知識(shí)。首先，我們來(lái)看看在動(dòng)手采血之前需要了解的tips?
單次采血量，采血間隔
小鼠的循環(huán)血量大約是72ml/kg。以25g的成年小鼠為例，它的循環(huán)血量大約為1.8ml。大鼠的循環(huán)血量大約是64ml/kg。以250g的成年大鼠為例，它的循環(huán)血量大約為16ml。
采集10%的循環(huán)血量之后，大約需要2周時(shí)間恢復(fù)。
狀況良好的小鼠一般采血量建議不超過(guò)循環(huán)血量的10%。有研究表明失血超過(guò)15%以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)發(fā)生血量減少性休克。以25g的成年小鼠為例，10%的循環(huán)血量大約是0.2ml。
采血之后，小鼠需要一段時(shí)間的恢復(fù)，其血液指標(biāo)才會(huì)恢復(fù)到正常水平。下面的表格列出了不同采血量對(duì)應(yīng)的恢復(fù)期：
尾尖采血
· 麻醉小鼠后，用溫水擦拭尾巴，引起輕微的血管擴(kuò)張。但水溫不要過(guò)高。
· 用無(wú)菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截?cái)嘈∈笪布?.5-1cm。如果需要多次采血，之后每次僅需截除2-3mm。
· 可以從尾部向尾尖方向按摩，以增加血流。但是，這會(huì)降低血樣的質(zhì)量，增加溶血的風(fēng)險(xiǎn)。
· 可以用毛細(xì)采血管收集血液，或直接滴入收集管中。
· 采血結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y）來(lái)止血。
· 每次采血量大約可達(dá)0.1ml。
應(yīng)用：適用于所需血量少的連續(xù)多次采血，如血糖或血常規(guī)的動(dòng)態(tài)檢測(cè)。
眼眶靜脈叢采血
· 小鼠經(jīng)氣體麻醉后，左手拇指及食指壓迫小鼠的頸部?jī)蓚?cè)，使眼球突出，眼眶后靜脈叢充血。也可以將小鼠放置在側(cè)臥位，拇指與食指分別置于小鼠頭頂和下頜，將皮膚向后及向下拉。
· 抓握時(shí)要避免對(duì)氣管施壓，否則可能會(huì)影響小鼠呼吸。
· 將毛細(xì)采血管置于內(nèi)側(cè)眼角處，并且以與鼻翼平面成30-45度刺入。
· 在輕輕旋轉(zhuǎn)采血管的同時(shí)施加壓力。血液將通過(guò)毛細(xì)作用流入采血管。
· 不能刺地過(guò)深，一般2-3mm即可。
· 采血結(jié)束后，立即松開(kāi)手指對(duì)小鼠的壓迫，使眼球復(fù)位，同時(shí)將采血器拔出。
· 可用干棉球壓住眼眶，確保止血。
· 一般眼眶靜脈叢采血量可以達(dá)到0.2-0.3ml。
應(yīng)用：適用于需中等量的血液、避免小鼠死亡的血液指標(biāo)的連續(xù)監(jiān)測(cè)。
頜下靜脈采血
· 保定小鼠，可將小鼠側(cè)臥，使小鼠頭部盡量固定。
· 在小鼠嘴角沿線與外眼角線橡膠處找到頜下靜脈的大致位置，會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)無(wú)毛的小點(diǎn)，有點(diǎn)像酒窩�；疚挥谧旖沁h(yuǎn)端稍低于下巴線。
· 針保持垂直于皮膚表面，刺入皮膚。深度不超過(guò)針頭的斜面。
· 拔出針頭后，血液就會(huì)流出。為方便采血，可使小鼠頭部低于心臟高度。
· 可以直接使血液滴入采集管，也可以使用毛細(xì)采血管。
· 采血結(jié)束后，按壓以止血。
· 一般采血量為0.2-0.5ml。
應(yīng)用：小量反復(fù)采血，無(wú)需麻醉，適用于所需血量少的連續(xù)多次采血。
隱靜脈采血
· 將小鼠置于固定管或架中，但保持后腿可自由活動(dòng)，剃除跗部的毛。
· 為使膝蓋與踝關(guān)節(jié)之間的隱靜脈更加明顯，可以在后腿膝蓋以上使用止血帶。在近尾側(cè)的皮膚表面可以找到隱靜脈。
· 針垂直于皮膚表面扎破血管。不要進(jìn)針過(guò)深，以免刺穿肌肉或碰到骨頭。
· 血液會(huì)從入針處慢慢流出，用毛細(xì)采血管收集，并松開(kāi)止血帶。
· 采血結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y）以止血，并將小鼠放回籠內(nèi)。
應(yīng)用：小量反復(fù)采血，無(wú)需麻醉，適用于所需血量少的連續(xù)多次采血。
心臟采血
一般有3種心臟采血的姿勢(shì)：
1、托起小鼠軀干使身體垂直與地面。身體直立以防止心臟的偏轉(zhuǎn)或胸部的扭曲。使用1毫升注射器和22g針頭。將針頭從胸部中央向下5mm處插入，深度5-10mm，將注射器與胸部保持25-30度。
2、使小鼠仰臥，通過(guò)胸骨垂直插入針頭。
3、使小鼠側(cè)臥，垂直于胸壁插入針頭。
· 如果血液沒(méi)有立刻進(jìn)入注射器，可以輕輕抽空針管，產(chǎn)生一個(gè)真空區(qū)。
· 當(dāng)注射器中出現(xiàn)血液時(shí)，將針管保持靜止并輕輕地抽拉活塞芯桿，以獲得更多地血液。
· 一般可以采到0.8-1.0ml血液。
應(yīng)用：適用于需血量大的實(shí)驗(yàn)終末期的動(dòng)物采血，常用于血常規(guī)、免疫、生化指標(biāo)的檢測(cè)。
這些采血方式應(yīng)該怎么選擇呢?
我們?cè)賮?lái)總結(jié)一下它們各自有什么特點(diǎn)。
看完了方法，別忘了要練習(xí)哦！
祝愿大家采血順利~
關(guān)于我們
上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，簡(jiǎn)稱"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科創(chuàng)板上市高科技生物公司（股票代碼：688265），始終以編輯基因、解碼生命為己任，專注于模式生物領(lǐng)域，打造了以基因修飾動(dòng)物模型研發(fā)為核心，涵蓋多物種模型構(gòu)建、飼養(yǎng)繁育、表型分析、藥物臨床前評(píng)價(jià)等多個(gè)技術(shù)平臺(tái)，致力于為全球高校、科研院所、制藥企業(yè)等客戶提供全方位、一體化的基因修飾動(dòng)物模型產(chǎn)品解決方案。
參考文獻(xiàn)
1、Guidelines for the survival bleeding of mice and rats.(2010).
2、Diehl K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J.Appl.Toxicol.21,15-23(2001).
3、Janet H, et al. Methods of Blood Collection in the Mouse.Lab Animal.29 (10):47-53.(2010).
4、Joslin O.T,et al. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.(2009)
5、Hem A., et al. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368. (1998)
單次采血量，采血間隔
小鼠的循環(huán)血量大約是72ml/kg。以25g的成年小鼠為例，它的循環(huán)血量大約為1.8ml。大鼠的循環(huán)血量大約是64ml/kg。以250g的成年大鼠為例，它的循環(huán)血量大約為16ml。
表1. 大小鼠的循環(huán)血量
采集10%的循環(huán)血量之后，大約需要2周時(shí)間恢復(fù)。
狀況良好的小鼠一般采血量建議不超過(guò)循環(huán)血量的10%。有研究表明失血超過(guò)15%以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)發(fā)生血量減少性休克。以25g的成年小鼠為例，10%的循環(huán)血量大約是0.2ml。
表2. 大小鼠建議最大采血量
采血之后，小鼠需要一段時(shí)間的恢復(fù)，其血液指標(biāo)才會(huì)恢復(fù)到正常水平。下面的表格列出了不同采血量對(duì)應(yīng)的恢復(fù)期：
表3. 大小鼠采血量及恢復(fù)期
如果需要多點(diǎn)采血，每周最大采血量最好不超過(guò)循環(huán)血量的7.5%；每?jī)芍茏畲蟛裳坎怀^(guò)循環(huán)血量的10%。尾尖采血
· 麻醉小鼠后，用溫水擦拭尾巴，引起輕微的血管擴(kuò)張。但水溫不要過(guò)高。
· 用無(wú)菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截?cái)嘈∈笪布?.5-1cm。如果需要多次采血，之后每次僅需截除2-3mm。
· 可以從尾部向尾尖方向按摩，以增加血流。但是，這會(huì)降低血樣的質(zhì)量，增加溶血的風(fēng)險(xiǎn)。
· 可以用毛細(xì)采血管收集血液，或直接滴入收集管中。
· 采血結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y）來(lái)止血。
· 每次采血量大約可達(dá)0.1ml。
應(yīng)用：適用于所需血量少的連續(xù)多次采血，如血糖或血常規(guī)的動(dòng)態(tài)檢測(cè)。
眼眶靜脈叢采血
· 小鼠經(jīng)氣體麻醉后，左手拇指及食指壓迫小鼠的頸部?jī)蓚?cè)，使眼球突出，眼眶后靜脈叢充血。也可以將小鼠放置在側(cè)臥位，拇指與食指分別置于小鼠頭頂和下頜，將皮膚向后及向下拉。
· 抓握時(shí)要避免對(duì)氣管施壓，否則可能會(huì)影響小鼠呼吸。
· 將毛細(xì)采血管置于內(nèi)側(cè)眼角處，并且以與鼻翼平面成30-45度刺入。
· 在輕輕旋轉(zhuǎn)采血管的同時(shí)施加壓力。血液將通過(guò)毛細(xì)作用流入采血管。
· 不能刺地過(guò)深，一般2-3mm即可。
· 采血結(jié)束后，立即松開(kāi)手指對(duì)小鼠的壓迫，使眼球復(fù)位，同時(shí)將采血器拔出。
· 可用干棉球壓住眼眶，確保止血。
· 一般眼眶靜脈叢采血量可以達(dá)到0.2-0.3ml。
應(yīng)用：適用于需中等量的血液、避免小鼠死亡的血液指標(biāo)的連續(xù)監(jiān)測(cè)。
頜下靜脈采血
· 在小鼠嘴角沿線與外眼角線橡膠處找到頜下靜脈的大致位置，會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)無(wú)毛的小點(diǎn)，有點(diǎn)像酒窩�；疚挥谧旖沁h(yuǎn)端稍低于下巴線。
· 針保持垂直于皮膚表面，刺入皮膚。深度不超過(guò)針頭的斜面。
· 拔出針頭后，血液就會(huì)流出。為方便采血，可使小鼠頭部低于心臟高度。
· 可以直接使血液滴入采集管，也可以使用毛細(xì)采血管。
· 采血結(jié)束后，按壓以止血。
· 一般采血量為0.2-0.5ml。
應(yīng)用：小量反復(fù)采血，無(wú)需麻醉，適用于所需血量少的連續(xù)多次采血。
隱靜脈采血
· 為使膝蓋與踝關(guān)節(jié)之間的隱靜脈更加明顯，可以在后腿膝蓋以上使用止血帶。在近尾側(cè)的皮膚表面可以找到隱靜脈。
· 針垂直于皮膚表面扎破血管。不要進(jìn)針過(guò)深，以免刺穿肌肉或碰到骨頭。
· 血液會(huì)從入針處慢慢流出，用毛細(xì)采血管收集，并松開(kāi)止血帶。
· 采血結(jié)束后，按壓傷口或使用止血?jiǎng)ㄈ缦跛徙y）以止血，并將小鼠放回籠內(nèi)。
應(yīng)用：小量反復(fù)采血，無(wú)需麻醉，適用于所需血量少的連續(xù)多次采血。
心臟采血
一般有3種心臟采血的姿勢(shì)：
1、托起小鼠軀干使身體垂直與地面。身體直立以防止心臟的偏轉(zhuǎn)或胸部的扭曲。使用1毫升注射器和22g針頭。將針頭從胸部中央向下5mm處插入，深度5-10mm，將注射器與胸部保持25-30度。
2、使小鼠仰臥，通過(guò)胸骨垂直插入針頭。
3、使小鼠側(cè)臥，垂直于胸壁插入針頭。
· 如果血液沒(méi)有立刻進(jìn)入注射器，可以輕輕抽空針管，產(chǎn)生一個(gè)真空區(qū)。
· 當(dāng)注射器中出現(xiàn)血液時(shí)，將針管保持靜止并輕輕地抽拉活塞芯桿，以獲得更多地血液。
· 一般可以采到0.8-1.0ml血液。
應(yīng)用：適用于需血量大的實(shí)驗(yàn)終末期的動(dòng)物采血，常用于血常規(guī)、免疫、生化指標(biāo)的檢測(cè)。
這些采血方式應(yīng)該怎么選擇呢?
我們?cè)賮?lái)總結(jié)一下它們各自有什么特點(diǎn)。
表4.不同采血方式的特點(diǎn)概況
看完了方法，別忘了要練習(xí)哦！
祝愿大家采血順利~
關(guān)于我們
上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，簡(jiǎn)稱"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科創(chuàng)板上市高科技生物公司（股票代碼：688265），始終以編輯基因、解碼生命為己任，專注于模式生物領(lǐng)域，打造了以基因修飾動(dòng)物模型研發(fā)為核心，涵蓋多物種模型構(gòu)建、飼養(yǎng)繁育、表型分析、藥物臨床前評(píng)價(jià)等多個(gè)技術(shù)平臺(tái)，致力于為全球高校、科研院所、制藥企業(yè)等客戶提供全方位、一體化的基因修飾動(dòng)物模型產(chǎn)品解決方案。
參考文獻(xiàn)
1、Guidelines for the survival bleeding of mice and rats.(2010).
2、Diehl K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J.Appl.Toxicol.21,15-23(2001).
3、Janet H, et al. Methods of Blood Collection in the Mouse.Lab Animal.29 (10):47-53.(2010).
4、Joslin O.T,et al. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.(2009)
5、Hem A., et al. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368. (1998)
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