MLKL在激動(dòng)劑誘導(dǎo)血小板促血栓形成和溶解細(xì)胞死亡研究機(jī)制詳解

 

結(jié)果：盡管血小板是無(wú)核細(xì)胞，但血小板在能量代謝方面很活躍，其能量代謝系統(tǒng)可以通過有氧糖酵解和線粒體氧化磷酸化供能，使血小板在不同情況下滿足不同功能狀態(tài)的能量需求。由于MLKL在激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血小板活化中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而血小板活化需要消耗大量的能量，那么MLKL對(duì)維持血小板高能量代謝狀況的作用又是如何呢？由于大多數(shù)人類有核細(xì)胞含有數(shù)百甚至數(shù)千個(gè)線粒體，而無(wú)核細(xì)胞血小板一般僅有5-8個(gè)線粒體，血小板含有的線粒體數(shù)量相對(duì)于常規(guī)含核細(xì)胞不到1%，這就要求進(jìn)行線粒體能量代謝檢測(cè)時(shí)，血小板樣品數(shù)量是常規(guī)細(xì)胞數(shù)量的百倍以上，如果線粒體能量代謝檢測(cè)方法中樣品孔檢測(cè)體積較小時(shí)（如只有幾微升檢測(cè)體積），就需要花大量時(shí)間進(jìn)行血小板數(shù)量梯度摸索，而奧地利Oroboros高精度氧化磷酸化功能表征系統(tǒng)具有0.5-3.5ml大樣品檢測(cè)倉(cāng)體積、樣品無(wú)需貼壁處理及快速進(jìn)行線粒體功能差異表征的技術(shù)特點(diǎn)，非常適合檢測(cè)含線粒體數(shù)量很少的血小板樣品；通過奧地利Oroboros高精度氧化磷酸化功能表征系統(tǒng)對(duì)血小板線粒體功能進(jìn)行表征分析，作者發(fā)現(xiàn)用NSA（MLKL抑制劑）預(yù)孵育組和未添加NSA的對(duì)照血小板（DMSO）組相比，耗氧率（Oxygen Consumption rate）幾乎沒有變化；添加凝血酶（Thrombin）后，發(fā)現(xiàn)NSA處理組耗氧率激增量顯著低于DMSO對(duì)照組，說(shuō)明MLKL促進(jìn)了線粒體電子傳遞的作用；添加寡霉素（Oligomycin，復(fù)合體V抑制劑）后，發(fā)現(xiàn)NSA處理組耗氧率降低量顯著低于DMSO對(duì)照組，表明NSA處理組的氧化磷酸化（OXPHOS）水平顯著低于DMSO對(duì)照組，說(shuō)明在NSA存在的情況下，凝血酶誘導(dǎo)的血小板OXPHOS功能顯著受損；同時(shí)也發(fā)現(xiàn)添加寡霉素后，NSA處理組質(zhì)子泄漏（Proton leak）水平顯著高于DMSO對(duì)照組，由于質(zhì)子泄漏代表不依賴于復(fù)合體V的質(zhì)子驅(qū)動(dòng)的氧氣消耗，表明MLKL對(duì)線粒體內(nèi)膜的穩(wěn)定作用，抑制質(zhì)子泄漏；以上數(shù)據(jù)表明MLKL對(duì)維持血小板線粒體正常功能運(yùn)行具有重要作用。

討論：雖然血小板在防止血管損傷時(shí)意外失血方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，但過度活躍的血小板與急性心肌梗死和缺血性中風(fēng)等嚴(yán)重血栓形成有關(guān)。因此，必須徹底了解血小板活化的機(jī)制，以設(shè)計(jì)有效的抗血栓性疾病的治療策略。鑒于MLKL在血小板生理學(xué)中的重要作用，它可能是一個(gè)治療血栓性疾病的潛在靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：Ekhlak, M., Kulkarni, P.P., Singh, V. et al. Necroptosis executioner MLKL plays pivotal roles in agonist-induced platelet prothrombotic responses and lytic cell death in a temporal order. Cell Death Differ 30, 1886–1899 (2023). https://doi.org/10.1038/s41418-023-01181-6.