細(xì)胞STR鑒定，常見(jiàn)問(wèn)題答疑

1. 報(bào)告結(jié)果中提示的多等位基因結(jié)果是什么？
答：正常的人源細(xì)胞組織細(xì)胞其STR圖譜，一個(gè)基因位點(diǎn)僅出現(xiàn)一個(gè)或2個(gè)峰。如發(fā)生細(xì)胞交叉污染現(xiàn)象，基因位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)多等位基因，即一個(gè)基因位點(diǎn)出現(xiàn)3個(gè)或以上峰�？紤]到微衛(wèi)星的不穩(wěn)定，也不排除細(xì)胞突變的情況。
2. 細(xì)胞匹配的判讀標(biāo)準(zhǔn)是什么，怎么通過(guò)結(jié)果大致分析是否存在交叉污染？
答：參考ATCC-ANSI細(xì)胞鑒定標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)細(xì)胞和官方數(shù)據(jù)比對(duì)，匹配度低于0.8則判定細(xì)胞和目標(biāo)細(xì)胞系不匹配。匹配度在0.8-1.0之間，判定細(xì)胞基本匹配，可能存在交叉污染或者傳代代次過(guò)高導(dǎo)致的細(xì)胞質(zhì)量下滑，位點(diǎn)突變的情況。
需注意，當(dāng)出現(xiàn)3個(gè)及以上多等位基因結(jié)果時(shí)，需進(jìn)一步參考數(shù)據(jù)庫(kù)排查是否存在 叉污染。匹配度為1.0則樣本和目標(biāo)細(xì)胞完全匹配，且細(xì)胞質(zhì)量較好。
3. 目前小鼠細(xì)胞的STR鑒定是否可以做？
答：目前除部分公布的小鼠細(xì)胞位點(diǎn)數(shù)據(jù)外，還采取自行收錄標(biāo)準(zhǔn)樣本的方式整合小鼠細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)，市面上常見(jiàn)的小鼠細(xì)胞系結(jié)果均可進(jìn)行鑒定。部分少見(jiàn)細(xì)胞系，需要通過(guò)定向數(shù)據(jù)比對(duì)的方式來(lái)確定來(lái)源。
4. 什么是 STR？細(xì)胞系鑒定原理簡(jiǎn)單描述？STR 檢測(cè)結(jié)果里邊的數(shù)字是什么意思？
 答：STR:基因上的短串聯(lián)重復(fù)序列分子標(biāo)記（ATATATATATATAT，數(shù)字代表段串聯(lián)序列重復(fù)次數(shù)）。每一株構(gòu)建的細(xì)胞系都有一組特異性的 STR 數(shù)據(jù)與之對(duì)應(yīng)，細(xì)胞系是否正確，檢測(cè)該樣本的 STR 與數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系 STR 比對(duì)是否一致即可。一旦細(xì)胞系的遺傳特性被確立，細(xì)胞系就應(yīng)該定期的檢測(cè)，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。
5. 什么時(shí)候需細(xì)胞系鑒定？
1、發(fā)表文章或申請(qǐng)課題經(jīng)費(fèi)前；
2、使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療（試驗(yàn)）前；
3、準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞；
4、一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí)；
5、新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室培養(yǎng) 5 代以上的細(xì)胞；
6、細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大；細(xì)胞功能不正常；
7，實(shí)驗(yàn)室新建立的細(xì)胞系；
6 ，所鑒定的細(xì)胞系數(shù)據(jù)庫(kù)沒(méi)有 STR 數(shù)據(jù)參考怎么辦？為什么會(huì)無(wú)匹配？原代細(xì)胞能夠做細(xì)胞鑒定嗎?
答：出現(xiàn)匹配不上任何已知數(shù)據(jù)情況，是因?yàn)檫@株細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)序列并沒(méi)有收錄在國(guó)際的細(xì)胞庫(kù)之中，導(dǎo)致送檢樣本與任何的序列都不匹，或者樣本是自主構(gòu)建的新細(xì)胞系。沒(méi)有對(duì)比數(shù)據(jù)的，按說(shuō)也要檢測(cè)一下 STR，只要做出來(lái) str 數(shù)據(jù)跟數(shù)據(jù)庫(kù)排查，如果最后無(wú)匹配結(jié)果，問(wèn)題不大，如果跟其他細(xì)胞匹配上 比如跟 hela 匹配上就有問(wèn)題。原代細(xì)胞亦可做細(xì)胞系 STR 鑒定，一方面將其 STR 與數(shù)據(jù)庫(kù)做個(gè)排查。原代細(xì)胞鑒定需客戶提供原始組織和原代細(xì)胞，成組檢測(cè)，以原始組織的 STR 分型結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)。
7. 細(xì)胞鑒定的官方數(shù)據(jù)來(lái)源？
答：DSMZ 數(shù)據(jù)庫(kù)，是整合4個(gè)國(guó)際權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)：美國(guó)ATCC、德國(guó)DSMZ、日本JCRB和RIKEN，Expasy數(shù)據(jù)庫(kù)輔助判斷。
8. 細(xì)胞鑒定STR體系涵蓋多少個(gè)位點(diǎn)？
答：國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)8個(gè)STR和1個(gè)性別鑒定位點(diǎn)，更額外贈(zèng)送12個(gè)STR位點(diǎn)輔助判斷。
9. 細(xì)胞鑒定STR體系是否能應(yīng)用于干細(xì)胞存儲(chǔ)領(lǐng)域？
答：細(xì)胞鑒定是一種司法親子鑒定技術(shù)，不僅可以鑒定商品化的細(xì)胞株，還能應(yīng)用于干細(xì)胞來(lái)源性輔助鑒定。入庫(kù)細(xì)胞和對(duì)應(yīng)干細(xì)胞存儲(chǔ)者來(lái)源是否一致，也可通過(guò)細(xì)胞鑒定來(lái)實(shí)現(xiàn)。
10. 細(xì)胞鑒定STR能否分辨轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的成功率和挑選轉(zhuǎn)染細(xì)胞株？
答：目前測(cè)試下來(lái)，轉(zhuǎn)染和基因改造的細(xì)胞系，STR結(jié)果基本一致，匹配度大概在0.9-1.0之間，僅通過(guò)STR的方法還是沒(méi)辦法做篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的目的，建議是通過(guò)WB和基金測(cè)序，單克隆挑選來(lái)篩選想要的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。