熱原及細菌內(nèi)毒素檢測第三期之醫(yī)療器械細菌內(nèi)毒素限值與測試方法詳解
本期文章將繼續(xù)挖掘細菌內(nèi)毒素檢測領域的細節(jié)，同時探討在實際操作中可能遇到的挑戰(zhàn)與解決方案。通過本期內(nèi)容的深入剖析，讀者將能更全面地理解細菌內(nèi)毒素檢測的實踐應用與策略優(yōu)化。
Q1：什么時候采用USP通則151家兔熱原試驗是合適的?
對于某些生物制品，21 CFR 610.13（b）要求進行家兔熱原試驗。如果根據(jù)21 CFR 610.9 的規(guī)定，證明有與兔熱原試驗等效的方法，則可免除21 CFR 610.13（b）中的要求。
對于人藥和獸藥，某些USP各論仍要求進行兔熱原試驗。即使有這些專論，如果企業(yè)能證明其熱原檢測方法與之相當，也可以用細菌內(nèi)毒素檢測或替代性細胞檢測方法來替代。FDA將根據(jù)具體情況考慮單核細胞活化等替代方法。
對于醫(yī)療器械和藥品物料，公司應該評估非細菌內(nèi)毒素熱原存在的風險。如果風險評估顯示非細菌內(nèi)毒素熱原可能存在，采用免法熱原測試應該是更恰當?shù)摹?
細菌內(nèi)毒素含量受到和測試物品理化性質(zhì)相關的多個因素干擾。如果這些干擾因素不能通過樣品稀釋（最大到MVD稀釋水平）或者其他驗證的樣品制備方法來減少，公司應該采用免法熱原測試。
Q2：對于適用于多品系動物的獸藥，如何確定細菌內(nèi)毒素限值是合適的?
對于標明可用于多個物種的獸藥產(chǎn)品，限值應以最小物種的最大產(chǎn)品劑量為基礎。如果標簽注明產(chǎn)品可用于幼年和成年動物，則幼年動物被視為最差情況。如果需要用動物的體重來計算劑量，公司應使用該物種的平均體重。
關于一些動物平均體重的清單，請參考FDA指南《WaiversofIn Vivo Demonstration of Bioequivalence o fAnimal Drugs in Soluble Powder Oral Dosage Form Products and Type A Medicated Aricles》。
如需了解該指南中未列出的動物體重，請聯(lián)系FDA獸藥中心（CVM,Center for Veterinary Medicine）。
Q3：醫(yī)療器械的細菌內(nèi)毒素限值是什么?
醫(yī)療器械和放射衛(wèi)生中心（CDRH）采用了以EU/mL為單位的USP細菌內(nèi)毒素參考標準用于醫(yī)療器械提取物限值。USP第<161>章《Transfusion and Infusion Assemblies and Similar Medical Devices》規(guī)定了其范圍內(nèi)醫(yī)療器械的細菌內(nèi)毒素限值。醫(yī)療器械的細菌內(nèi)毒素限值取決于設備的預期用途和設備接觸的物品（如血液、心血管系統(tǒng)、腦脊液、鞘內(nèi)給藥途徑、永久植入設備和皮下植入設備）。
對于直接或間接接觸心血管系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的醫(yī)療器械，采用下述提取量建議，限值為0.5EU/mL或20EU/每器械。對于與腦脊液接觸的器械，限值為0.06EU/mL或2.15EU/每器械。對于直接或間接接觸眼內(nèi)環(huán)境的器械，可能適用較低的細菌內(nèi)毒素限值。有關具體建議，請聯(lián)系相應的審查部門。
為測試準備淋洗液或者萃取液的過程可能因設備而異。有些醫(yī)療器械可以沖洗，有些可能需要浸泡，而有些則可能需要拆卸。除非其他藥典標準另有規(guī)定，我們建議的沖洗量包括以下內(nèi)容：
(1)每10個測試樣品應該用40ml無熱原水來沖洗；
(2)對于異常小或異常大的器械，在選擇淋洗液或者萃取液體積時，可將器械與患者接觸的表面積作為調(diào)整因素。細菌內(nèi)毒素限值可作相應調(diào)整。在任何情況下，沖洗/萃取程序都不應導致細菌內(nèi)毒素的稀釋超過USP<85>中的建議。對于抑制/增強測試，淋洗液/取液和器械的淋洗物/萃取物都應該進行測試。
用于測試或者干擾挑戰(zhàn)的醫(yī)療器械的例子，包括包封抗凝劑、包含重金屬或者粒子的器械。在這些情況下,干擾的處理措施可以包括消解、稀釋和緩沖物的添加，離心或者過濾。
在同一手術過程中，或在同一手術部位放置同一器械時，同一制造商生產(chǎn)的同一器械的多個單位通常應達到與手術過程中施用的單一器械相同的細菌內(nèi)毒素限值。如果已知或打算在單個手術中使用同一器械的多個單位，制造商應說明偏離本指南中確定的總體細菌內(nèi)毒素限值的理由。
當醫(yī)療器械制造商計劃使用嚴重偏離本指南或公認標準的LAL檢測時，應根據(jù)FDCA第 510（k）條提交上市前通知書「510（k）」，或根據(jù)FDCA第515條提交上市前批準申請（PMA）補充文件。重大偏離包括但不一定限于：較高的細菌內(nèi)毒素濃度放行標準，用于抑制/增強測試的樣品少于3批次，較低的細菌內(nèi)毒素靈敏度，器械淋洗方案導致細菌內(nèi)毒素比本指南建議的更大程度的稀釋。
Q4：關于治療藥品的定期篩選，F(xiàn)DA的期望是什么?
理想情況下，只要在LAL檢測中不存在干擾/增強特性，就應篩查未稀釋的產(chǎn)品。但是，有些產(chǎn)品處方中的成分會干擾LAL測試。對于此類處方，USP建議對產(chǎn)品進行稀釋，以克服干擾或增強特性。計算出的 MVD是可以檢測到細菌內(nèi)毒素限值的樣品稀釋度，但不應作為常規(guī)檢測稀釋度。當產(chǎn)品在開發(fā)過程中遇到干擾時，F(xiàn)DA建議制藥公司確定產(chǎn)品最低稀釋濃度以抵消干擾情況。
FDA建議企業(yè)以略高于中和干擾的產(chǎn)品稀釋度開始后續(xù)的產(chǎn)品篩選。例如，如果產(chǎn)品的MVD為1:100，而產(chǎn)品在1:10時顯示出抑制作用，但在1:20時沒有，則最好以1:30的稀釋度篩選產(chǎn)品。如果在這個水平上檢測到細菌內(nèi)毒素，那么企業(yè)就應該對產(chǎn)品進行全面檢查，來測量細菌內(nèi)毒素的準確數(shù)值。
Q5：細菌內(nèi)毒素工作標準品(CSE)是否仍可用于細菌內(nèi)毒素檢測？
細菌內(nèi)毒素工作標準品(CSE)是指除國際或國家參考標準以外的細菌內(nèi)毒素制劑，其校準可追溯至國際參考細菌內(nèi)毒素標準。CSE可以是二級或三級標準品，通常由LAL試劑制造商生產(chǎn)和標定，用于在規(guī)定的檢測條件下與特定批次的試劑配合使用。
▲細菌內(nèi)毒素工作標準品(CSE)
CSE已成為制備標準曲線校準物和用作化驗對照的公認來源，為LAL用戶節(jié)省了成本，并有助于保存一級標準物質(zhì)的庫存。FDA鼓勵繼續(xù)使用根據(jù)國際細菌內(nèi)毒素參考標準進行適當校準的CSE。
細菌內(nèi)毒素檢測領域充滿了挑戰(zhàn)與機遇，隨著科技進步與監(jiān)管要求的持續(xù)更新，其檢測方法和標準正不斷完善。盡管本期文章已深入解析多個關鍵問題，但細菌內(nèi)毒素檢測的實踐應用與策略優(yōu)化依然是一個不斷發(fā)展的過程。接下來的文章中，我們將進一步挖掘該領域的深度與廣度，探討更多實際操作挑戰(zhàn)與解決方案，并緊跟最新研究成果和行業(yè)動態(tài)，為讀者呈現(xiàn)更多前沿信息與洞見，敬請期待。
