免疫熒光必備ProLong Gold & SlowFade Gold抗淬滅效果比照明細

瀏覽次數(shù)：3566　發(fā)布日期：2015-7-22　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

如果熒光染色的目標分子豐度比較低或者樣本在強激發(fā)光下長時間放置，很容易出現(xiàn)明顯的光漂白作用，即熒光淬滅作用。專門開發(fā)了 ProLong 和 SlowFade 兩個系列抵抗熒光信號淬滅的試劑。其主要原理是可以有效避免熒光染色后的固定細胞或組織等樣品不被氧化，從而防止熒光淬滅導(dǎo)致的熒光信號減弱現(xiàn)象。

則能提供給樣品熒光信號數(shù)月的保護，只要將樣品封片放置在干燥避光的環(huán)境下，熒光信號可以在一年甚至更長時間內(nèi)不減弱或是淬滅。但該系列產(chǎn)品在處理樣品以后必須室溫避光放置 24 小時才能進行觀察和圖象記錄，否則其熒光顏色會因折光律的改變而與實際顏色有所不同（圖 1）。

處理樣品后可以直接進行觀察與圖象記錄，其可保證熒光信號在 3 到 4周內(nèi)不明顯減弱，如果適當封片還可以延長更多時間。

抗淬滅劑使用簡便，只需加 1 滴至玻片即可。

Figure 1. ProLong® Gold 在凝固的過程中折射率不斷增加

Figure 2. ProLong® Gold (圖 A) and SlowFade® Gold (圖 B)

抗淬滅劑有效防止光漂白用不同的抗淬滅劑將 FITC 標記的微球封片，

100 瓦貢弧燈照射 30 秒，40x/1.3 NA 油鏡觀察，

12-bit 單色 CCD 成像。取20 個微球的平均熒光強度作圖。

ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 的抗淬滅效果：

（以 40X/1.3 NA 物鏡 100 瓦貢弧燈連續(xù)照射 30 秒后，與初始熒光強度相比的百分率表示）

操作步驟：

適用于多數(shù)的固定樣品，但由于含有甘油，不適于某些用途，如親脂的膜染料 Dil。

1．1 預(yù)溫試劑：

從冰箱中取出試劑，平衡至室溫；不推薦使用其他的熱源，這樣會降低產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

1．2 加封片介質(zhì)（抗淬滅劑）：

將切片上多余的液體去除，加 1 滴（或適量）抗淬滅劑，蓋上蓋玻片；樣本固定在蓋玻片上的，加1 滴抗淬滅劑于干凈的玻片上，小心將蓋玻片放到滴有淬滅劑的位置，避免產(chǎn)生氣泡。

1．3準備觀察：

用 ProLong 封片的，將玻片置于黑暗干燥處待其凝固，時間從幾個小時到過夜，依樣本的厚度和環(huán)境的相對濕度而不同。推薦凝固 24 小時。若需長期貯存，在凝固后將蓋玻片的邊緣封住，防止封片劑收縮使樣品扭曲變形。封好后，將玻片豎直存放在有蓋的玻片盒中，室溫、4℃或≤-20℃保存，加入干燥劑。若需馬上觀察，用指甲油或熱蠟固定蓋玻片的一角防止移動，邊緣保持干凈便于凝固。凝固后再將邊緣封好便于長期保存。

用 SlowFade 封片的，可立即觀察。較厚的樣品，要等到試劑完全滲透。必要時也可以用指甲油或熱蠟固定蓋玻片的一角后觀察。

熒光顯微鏡的設(shè)置：

樣本在抗淬滅劑干燥之前也可以觀察，但二者接觸的越久，抗淬滅的效果越好，尤其是 ProLong，其折射率也會有變化。減少在光下的暴露時間，用中等強度的濾光片，僅在觀察和記錄圖像時光照。保證好的成像效果，拍照時用最小光學(xué)、最高數(shù)字的光圈，較低的放大倍數(shù)，高質(zhì)量的光學(xué)濾片，高速膠片和高效的鏡頭。

另外，ProLong® Gold 和 SlowFade® Gold 抗淬滅劑還有含 DAPI 的型式，減少了復(fù)染 DNA 的步驟。