Freedom EVO在診斷用維生素B檢測(cè)方面帶來(lái)的積極作用

質(zhì)譜法正在快速成長(zhǎng)為微量元素（如維生素B1、B6、B12和D）、類(lèi)固醇、荷爾蒙和許多其他其他藥物的首選定量分析方法。對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室，質(zhì)譜技術(shù)的瓶頸并不在于分析本身，而在于如何預(yù)處理樣品，去除可能干擾結(jié)果的蛋白質(zhì)和其他生物學(xué)分子。

過(guò)去30年，人們對(duì)于微量元素在維持老齡化人群健康方面的作用的認(rèn)識(shí)，越來(lái)越深刻。但僅僅在過(guò)去十年左右，能夠有效檢測(cè)飲食或代謝之中的缺乏微量元素的可靠實(shí)驗(yàn)方法才成為常態(tài)。認(rèn)識(shí)的深入和有效檢測(cè)手段的擴(kuò)展，導(dǎo)致臨床實(shí)驗(yàn)室從主要或輔助機(jī)構(gòu)接收到的導(dǎo)致這方面的需求激增，這就要求臨床實(shí)驗(yàn)室變革工作方式變化，以應(yīng)對(duì)日益增長(zhǎng)的工作負(fù)擔(dān)。

維生素B1（硫胺素）和B6（吡哆醇）分別負(fù)責(zé)從葡萄糖和脂肪中提取能量，同時(shí)參與很多其他代謝通路。對(duì)這兩種維生素的檢測(cè)需求也出現(xiàn)了大量增長(zhǎng)。荷蘭Noordwest Ziekenhuisgroep (Northwest Clinics) Alkmaar 的臨床化學(xué)部門(mén)一年要進(jìn)行這類(lèi)代謝物的檢測(cè)數(shù)量就要超過(guò)19000起。該部門(mén)臨床化學(xué)家Edwin ten Boekel表示：“我們部門(mén)是Northwest Clinics的兩大實(shí)驗(yàn)室之一，服務(wù)北荷蘭大約60萬(wàn)人口。我們實(shí)驗(yàn)室平時(shí)非常忙碌，每天要出具超過(guò)1萬(wàn)名病人的報(bào)告結(jié)果，因此需要采取快速、有效的分析流程，確保我們能夠應(yīng)付這一工作負(fù)擔(dān)“。

“早在20多年前，我們便已開(kāi)始在HPLC系統(tǒng)上定量維生素B1和B6，但這一實(shí)驗(yàn)涉及一個(gè)衍生步驟，需要進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的后續(xù)分析。此外，該實(shí)驗(yàn)還需要大量的人工加樣技術(shù)，因而要花上大量時(shí)間進(jìn)行高度重讀的工作。鑒于此，我們最近開(kāi)始尋求實(shí)現(xiàn)樣品制備自動(dòng)化的方法，以期提高通量、降低人為誤差、消除加樣錯(cuò)誤。我們并未直接對(duì)自己現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行自動(dòng)化處理，而是選擇過(guò)渡到采用質(zhì)譜(UHPLC-MSMS)技術(shù)的高效液相色譜法，利用支持自動(dòng)化的蛋白沉淀步驟進(jìn)行分析錢(qián)樣品處理。

我們考察了很多可實(shí)現(xiàn)這類(lèi)樣品制備自動(dòng)化的系統(tǒng)，F(xiàn)reedom EVO®平臺(tái)在阿姆斯特丹的展示令我印象非深刻。我們的目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)LC-MS樣品制備完全自動(dòng)化，根據(jù)Tecan的建議，我們購(gòu)買(mǎi)了一臺(tái)Freedom EVO 150工作站。

我們實(shí)驗(yàn)室的Freedom EVO于2016年夏季開(kāi)始試用，并針對(duì)96孔板形式應(yīng)用進(jìn)行了優(yōu)化。含有患者溶解全血樣品的反應(yīng)板、校準(zhǔn)劑和質(zhì)控樣品放置在儀器架上，向每個(gè)孔中加入三氯乙酸(TCA)，以便沉淀血漿蛋白。隨后密封檢測(cè)板，并在離心機(jī)之中離心，然后采用Tecan系統(tǒng)，將每個(gè)孔的上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的96孔板中。隨后，將這塊可以直接進(jìn)行分析的檢測(cè)板重新密封，轉(zhuǎn)移到一臺(tái)獨(dú)立的UHPLC-MSMS系統(tǒng)上。Edwin補(bǔ)充說(shuō)：“盡管我們之前并沒(méi)有使用Tecan平臺(tái)的經(jīng)驗(yàn)，但一旦您熟悉Freedom EVO，就會(huì)發(fā)現(xiàn)這一系統(tǒng)非常易用。Tecan的客戶(hù)支持部門(mén)的工作也非常出色；他們非常友善，我們的咨詢(xún)從未出現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間等待無(wú)回復(fù)的情況。我們現(xiàn)在已經(jīng)在這款儀器上進(jìn)行了多項(xiàng)試驗(yàn)方案，相對(duì)于我們之前的移液操作步驟，自動(dòng)化操作的可重復(fù)性提高了不少。我們通過(guò)反復(fù)處理不同批次的同一樣品，進(jìn)行了對(duì)照試驗(yàn)。通過(guò)使用手持式條形碼掃描儀和條形碼標(biāo)記的微孔板，我們還能夠提高可追溯性——這對(duì)診斷實(shí)驗(yàn)室而言無(wú)疑十分重要。

最重要的是，F(xiàn)reedom EVO的自動(dòng)化樣品制備將處理等量樣品所需的時(shí)間減半。它讓我們不僅避免了員工的樣品重復(fù)移液工作，更解放了人力從事其他工作任務(wù)。Edwin總結(jié)道。

NWZ的Freedom EVO可提供全自動(dòng)的分析前處理

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