剖析磁珠分離的學(xué)問——Dynabeads 細(xì)胞分離與擴(kuò)增

·良好的回收和純度基于高質(zhì)量的MNC制備，其中顆粒細(xì)胞和血小板的數(shù)量要低。

·在混勻步驟使用HulaMixer™樣品混合器（目錄編號(hào)15920D）以確保有足夠的抗體與靶細(xì)胞相結(jié)合。

·在抗體結(jié)合步驟之后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行良好的洗滌，以去除未結(jié)合的抗體。

·樣本制備：所有的分離操作都必須在單細(xì)胞懸液中進(jìn)行。

·請(qǐng)確保使用了正確的細(xì)胞數(shù)量，稀釋倍數(shù)和抗體混合物體積，Dynabeads™磁珠和緩沖液系統(tǒng)。

·在混勻步驟使用HulaMixer™樣品混合器（目錄編號(hào)15920D）以確保分離操作中的混合效果良好。

·在接觸磁力架前的最后操作步驟中，用戶須使用1 mL槍頭吹打10次以上來(lái)將細(xì)胞/磁珠充分重懸。這一操作能夠幫助用戶捕獲滯留的目的細(xì)胞。

·血樣應(yīng)保存于室溫直至制備MNC，MNC制備過(guò)程本身也應(yīng)該于室溫下進(jìn)行。

·應(yīng)輕柔地處理樣品，以最大程度地減少機(jī)械剪切力。如果可能，請(qǐng)使用注射器/針頭手動(dòng)滴入血樣，而不要使用Vacutainer™管，因?yàn)榇祟悩悠饭苤械恼婵諚l件通常會(huì)導(dǎo)致血小板與單核細(xì)胞的共同活化。

·檸檬酸鈉已知能夠“穩(wěn)定”血小板并避免其活化，同時(shí)包含——除作為抗凝劑的檸檬酸緩沖液之外——茶堿，腺苷和雙嘧達(dá)莫。

在此，我們整理了以下建議：

·在操作過(guò)程中避免不必要的延遲。

在此，我們整理了以下建議：

·樣本制備過(guò)程非常重要。所有的分離操作都必須在單細(xì)胞懸液中進(jìn)行。對(duì)于直接從全血樣本中分離某一類型細(xì)胞（如單核細(xì)胞）的操作而言，我們推薦您在分離前對(duì)血樣進(jìn)行洗滌，以去除其中的干擾因素。

·對(duì)于指定了“混勻”操作的所有孵育過(guò)程而言，必須使用一款合適的混合器�？墒褂媚軌蛲瑫r(shí)提供傾斜和旋轉(zhuǎn)功能或倒轉(zhuǎn)混合功能的混合器（如HulaMixer™樣品混合器（目錄編號(hào)15920D））。

·如使用FlowComp™試劑盒，在加磁珠前先在細(xì)胞中加入抗體（間接法），則應(yīng)在加磁珠前通過(guò)洗滌去除過(guò)量的抗體。

·在與解離試劑孵育后，我們推薦您在將樣本放置到磁力架上之前，使用1 mL槍頭吹打樣品10次以上，以充分重懸樣本。

·用戶須在細(xì)胞分離過(guò)程中使用推薦的分離緩沖液。PBS中不可含有Ca2+和Mg2+，因?yàn)槎�價(jià)陽(yáng)離子會(huì)導(dǎo)致補(bǔ)體激活和細(xì)胞聚集。

·樣品中發(fā)生細(xì)胞聚集會(huì)同時(shí)嚴(yán)重降低細(xì)胞分離的得率和純度。

在此，我們整理了以下建議：

·由于DSB-X 生物素-鏈霉親和素之間的結(jié)合隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸變強(qiáng)；因此不要將釋放步驟的時(shí)間延長(zhǎng)至實(shí)驗(yàn)方案中規(guī)定的時(shí)間以上。在某些案例中，更短的孵育時(shí)間會(huì)獲得更高的得率。