武漢英科生物河豚毒素檢測試劑盒技術(shù)詳解 達(dá)國際一流水平

 

與LC-MS儀器對比試驗，結(jié)果符合率100%，批間差異小于0.1%，試劑盒穩(wěn)定高，抗干擾力強。

按照競爭性ELISA操作過程，對不同稀釋度的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測定，以各孔平均OD值與對照組的OD值比值的logit函數(shù)為縱坐標(biāo)，以不同濃度河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖所示：線性回歸方程為y＝-1.9695x＋3.3899，R²＝0.9902；線性范圍為5-500 ng/mL，最低檢測限為5 ng/mL。

  

添加250 ng和500 ng的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品的1 g河豚魚魚肉中，通過競爭性ELISA檢測結(jié)果如表所示：添加250 ng標(biāo)準(zhǔn)品時，回收率為159%，添加500 ng標(biāo)準(zhǔn)品時，回收率為108%。產(chǎn)品回收率偏高，我們分析可能是由于洗板次數(shù)太多，導(dǎo)致少量的抗體抗原脫離，或者是由于實驗時間偏長，抗體的效價減弱引起。產(chǎn)品回收率偏高，不影響檢測靈敏度，由于產(chǎn)品檢測限較低(5 ng/mL),所以該產(chǎn)品可以滿足日常對河豚魚的檢測工作要求。

 

對濃度為10、50、100、150 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測，結(jié)果如表所示：10-150 ng/mL 4個標(biāo)準(zhǔn)品濃度變異系數(shù)為1.93-3.77%，平均變異系數(shù)為2.76%。

 

變異系數(shù)CV %=（標(biāo)準(zhǔn)偏差SD /平均值Mean）×100%

 

 

方法依據(jù)：GBT 5009.206-2007 鮮河豚魚中河豚毒素的測定

 

計算公式：X＝C×D×V/m

         X:樣品中河豚毒素含量，單位為微克每千克(μg/kg)

         C:酶標(biāo)板上測的河豚毒素含量，單位為納克每毫升（ng/mL）

         D:樣品稀釋倍數(shù)

         V:提取溶液的定容體積，單位為毫升（mL）

         m:檢測樣品的質(zhì)量，單位為克（g）

 

關(guān)于河豚魚的毒性,一般分為4個毒力等級:毒性高于1000 MU/g為劇毒級;介于100 MU/g～1000 MU/g之間為強毒級;介于10 MU/g～100 MU/g之間為弱毒級;低于10 MU/g為無毒級(無毒級中使小鼠致死的情況可視為微毒級)。據(jù)張理對鼠單位的定義 (1 MU=0.22 μg)。

 

根據(jù)上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程(y=a×x-b)。其中 a、b為系數(shù)，y為抑制率(A0-A /A0%)，x為Log(100*河豚毒素濃度)。根據(jù)樣品的OD₄₉₀ (A)值計算抑制率,再根據(jù)公式計算出河豚毒素的濃度。結(jié)果上表所示：河豚毒素在浙江與海南省常見河豚魚的種類分布差異顯著，菊黃東方鲀未檢測出毒性，屬于無毒級別；雙斑東方鲀雖有檢測出毒性但也屬于無毒級別，其中雄性雙斑東方鲀的脾臟和胃毒力高于雌性；野生月腹刺鲀的毒力明顯高于養(yǎng)殖品種。