瓊脂糖凝膠電泳中影響凝膠聚合的因素

對于一般的分析工作，特別是定量分析工作來講，人們強(qiáng)調(diào)制備的凝膠要有很好的可 重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復(fù)性，比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大，那么在 這樣的條件下，所得到的分析結(jié)果，其可信性就有問題，往往會使幾次結(jié)果不能重復(fù)。所 以，為了要獲得可靠的分析結(jié)果，在制膠時對能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。 有哪些主要因素，又怎樣來控制它們的條件，簡述如下：

(1) 制備凝膠用的主要試劑

• 丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級的試劑。存放時間一般不超過1年, 如果存放時間過長，丙烯酰胺受潮水解，丙烯酸含量增多。若利用它為單體,聚合時孔徑很 不均一，表現(xiàn)現(xiàn)象是聚合時間延長，甚至很難聚合，這就必須重結(jié)晶。對于定量分析工作一 般都要求對單體進(jìn)行重結(jié)晶。

丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺應(yīng)放在棕色瓶屮，干燥，低溫( + 4C)條件下保存。丙烯酰 胺經(jīng)陽光照射，自身會聚合成長鏈，酰胺基也會縮合形成亞胺橋,從而影響交聯(lián)結(jié)果。
配制成的貯存液，也應(yīng)盛于棕色瓶中，于+ 4 C保存，時間不超過1個月。

• TEMED應(yīng)密封置于冰箱中貯存，使用的量應(yīng)使凝膠能在30〜60分鐘內(nèi)聚合完 成，如前述不再重復(fù)。
• 過硫酸鉉應(yīng)在臨用前配制。配制好的溶液應(yīng)在冰箱中存放,使用期不超過1星 期。存放1星期后的過硫酸鉉，可能仍會起作用，但不適用來作精細(xì)的分析工作。

(2) 溫度
必須保持聚合溫度的恒定。聚合速度與溫度有關(guān)，一般是溫度高聚合快，而聚合的快 慢影響交聯(lián)孔徑的大小，所以，必須保持恒定溫度。通常都固定在與電泳相同的溫度。凝 膠的聚合反應(yīng)是一個放熱反應(yīng)，所以必須有效地散熱。一般用薄壁玻璃管在流通空氣中進(jìn) 行凝膠聚合，便能達(dá)到散熱的目的°

(3) 氧氣
氧是凝膠鏈合成反應(yīng)的終止劑。所以，制膠前必須充分抽氣，使0₂降低到一定水平 以下或者充以惰性氣體,如氧氣來降低0₂的含量。

(4) 光照
光照的時間和強(qiáng)度都和凝膠的聚合速度有關(guān)。因此，必須固定光源強(qiáng)度、光照距離和 光照時間。
注意和控制好以上幾點(diǎn),制備得到的凝膠其可重復(fù)性的程度就高。