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腦缺血再灌注模型實(shí)驗(yàn)介紹(MCAO模型)

瀏覽次數(shù):534 發(fā)布日期:2023-7-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
缺血性腦血管病(ICVD)是威脅人類健康與生存的主要疾病之一,是中老年人的常見病,具有發(fā)病率、死亡率、致殘率、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn),是目前重點(diǎn)防治的一種疾病。目前科研工作者通過在動(dòng)物上復(fù)刻這種疾病,方便研究藥物的治療效果或者發(fā)病機(jī)制更方便。目前常見的大鼠模型是腦缺血再灌注(MCAO)模型,下面對(duì)這個(gè)模型的建立以及后續(xù)的機(jī)制研究方案做一些介紹,供各位科研工作者參考。
 
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:取適應(yīng)性飼養(yǎng)一周的健康SD大鼠,雌雄均可
2.術(shù)前器械及物品準(zhǔn)備(所有物品消毒備用)
1)干棉球,酒精棉球
2) 碘伏+棉簽
3)小動(dòng)物麻醉機(jī)
4) 常規(guī)手術(shù)器械
5) 顯微手術(shù)器械
6)縫合包
7)小動(dòng)物呼吸機(jī)
8)6-0帶線縫合針
3.麻醉:麻醉前將呼吸機(jī)進(jìn)氣口連接麻醉機(jī)出氣口。大鼠在小動(dòng)物麻醉機(jī)箱體內(nèi)預(yù)麻醉;
4.預(yù)麻醉后將大鼠以仰臥位固定在解剖板上,戴好麻醉機(jī)面罩,頸中部備皮,消毒;
5.沿頸部正中切開皮膚,鈍性分離皮下組織,在分離過程中會(huì)看到頜下腺,將腺體輕輕推到一側(cè),分離到氣管前肌后,沿右側(cè)胸鎖乳突肌腱向下分離,見到頸動(dòng)脈鞘后可用拉鉤將皮膚肌肉固定好。此時(shí)可見到頸總動(dòng)脈,小心向頭側(cè)跟心側(cè)剝離勁動(dòng)脈跟其隨行的神經(jīng),注意動(dòng)作要輕,不要損傷神經(jīng);
6.剝離到頭側(cè)約0.5cm時(shí)可以看到頸總動(dòng)脈分成頸內(nèi)動(dòng)脈跟頸外動(dòng)脈,繼續(xù)剝離2根血管跟神經(jīng),此時(shí)用預(yù)先準(zhǔn)備好的血管夾夾閉頸總動(dòng)脈(盡量靠心端),準(zhǔn)備好的一根絲線結(jié)扎死頸外動(dòng)脈(盡量遠(yuǎn)離分叉處),另外一根套在頸外動(dòng)脈(接近分叉處)打活結(jié)備用。用血管夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈;
7.將大鼠手術(shù)部位移至體視鏡下,用顯微剪在頸外動(dòng)脈上斜行剪一個(gè)小口,用顯微鑷夾起MCAO線拴從血管上的小口穿入血管,穿到分叉處時(shí)輕輕提起結(jié)扎頸外動(dòng)脈的絲線,待線拴進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,稍微拉緊之前打活結(jié)的絲線,松開血管夾,繼續(xù)向里面推送線拴,插入至顱內(nèi)微感阻力時(shí)拉緊活結(jié);
8.缺血90分鐘后,拔出線栓,把活結(jié)扎死?p合肌肉跟皮膚。并進(jìn)行尾靜脈注射,24h后取材。
 
目前實(shí)驗(yàn)室較多采用MCA阻斷0min、90min和120min的短暫腦缺血-再灌注模型,研究多種藥物對(duì)MCAO的治療效果和分子機(jī)制,取材后檢測TTC判斷造模情況以及大鼠神經(jīng)功能評(píng)分;
 
常規(guī)研究MCAO模型的動(dòng)物分組方法如下:
  1. 假手術(shù)組
  2. MCAO模型組
  3. MCAO模型組+給藥組
  4. MCAO模型組+SIRNA組(腺相關(guān)病毒注射)
 
一般給藥方式可以為:灌胃、尾靜脈注射、腹腔注射等;可以根據(jù)試劑的情況調(diào)整給藥頻次和方式;甚至也可以先給藥幾天以后再造模也可以;
另外一種腺相關(guān)病毒注射:目的是為了在動(dòng)物體內(nèi)讓某種蛋白表達(dá)量上升或者下降,用于研究相關(guān)分子機(jī)制的;
 
模型結(jié)束后取樣檢測,進(jìn)行藥物治療效果評(píng)估以及可能相關(guān)的分子機(jī)制。
  1. TTC檢測;
  2. QPCR檢測;
  3. WB檢測;
  4. 神經(jīng)功能評(píng)分;
  5. 行為學(xué)檢測:比如平行木實(shí)驗(yàn)、爬繩實(shí)驗(yàn)等;
  6. 組學(xué)檢測
來源:北京至真科言生物科技有限公司
聯(lián)系電話:13125140628
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