巨噬細(xì)胞介紹以及M1/M2極化實(shí)驗(yàn)操作步驟

      巨噬細(xì)胞是一類(lèi)位于外周血、炎癥組織中的白細(xì)胞，屬于免疫細(xì)胞中單核細(xì)胞類(lèi)群，主要通過(guò)吞噬細(xì)菌、死亡細(xì)胞或細(xì)胞殘片參與非特異性免疫調(diào)節(jié)，巨噬細(xì)胞將信號(hào)傳遞給其他淋巴細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞參與特異性免疫調(diào)調(diào)節(jié)。
         巨噬細(xì)胞進(jìn)入血液中以單核細(xì)胞前體形式存在，當(dāng)單核細(xì)胞浸潤(rùn)到組織中，會(huì)分化成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞主要存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝臟以及脾臟等組織中。巨噬細(xì)胞根據(jù)功能以及炎癥分泌水平分為M1型和M2型巨噬細(xì)胞兩種亞群。M1巨噬細(xì)胞主要由LPS及IFNγ激活，分泌IFN-γ、TNF-α等促炎癥因子；M2巨噬細(xì)胞主要由IL4、IL13、M-CSF等激活，主要分泌IL10等抗炎癥因子。

       巨噬細(xì)胞的通常鑒定方式為流式細(xì)胞術(shù)或者免疫熒光實(shí)驗(yàn)，一般是通過(guò)一些巨噬細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行的，常見(jiàn)的人和小鼠M1巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常見(jiàn)人和小鼠M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD206、CD204、CD163等。

       這2種亞群的作用：①作為抗原提呈細(xì)胞；②殺傷腫瘤效應(yīng)細(xì)胞；③巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制；④活化的巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后，通過(guò)釋放溶解細(xì)胞酶直接殺傷腫瘤細(xì)胞；⑤處理和呈遞腫瘤抗原，激活T細(xì)胞以產(chǎn)生特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答；⑥巨噬細(xì)胞表面上有FC受體，可通過(guò)特異性抗體介導(dǎo)ADCC效應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞；⑦活化的巨噬細(xì)胞可分泌腫瘤壞死因子（TNF）等細(xì)胞毒性因子和產(chǎn)生超氧化代謝產(chǎn)物間接殺傷腫瘤細(xì)胞。

       基礎(chǔ)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞巨噬細(xì)胞模型種類(lèi)很多，來(lái)源不同種屬不同需要的誘導(dǎo)因子的時(shí)長(zhǎng)和濃度均不相同，后續(xù)的機(jī)制也有所差異；常使用細(xì)胞有小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞、人THP1單核細(xì)胞、小鼠BMDM骨髓細(xì)胞等；一般巨噬細(xì)胞研究主要使用人種屬細(xì)胞系或者小鼠細(xì)胞系。而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究巨噬細(xì)胞的造模更多是偏向于炎癥模型，例如急性肺損傷模型。下列給大家簡(jiǎn)單介紹。
 
（1）THP-1（人單核細(xì)胞）
THP-1是來(lái)自急性單核細(xì)胞白血病患者血液分離而來(lái)，在基礎(chǔ)科研實(shí)驗(yàn)中，常常誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞來(lái)進(jìn)行機(jī)制研究；THP-1通常受PMA（佛波酯）150nmol/L誘導(dǎo)24h即可分化為巨噬細(xì)胞，然后在PMA持續(xù)存在的情況下，LPS（100ng/ml）、IFNγ（20ng/ml）誘導(dǎo)48h，產(chǎn)生M1巨噬細(xì)胞；IL4（20ng/ml）、IL13（20ng/ml）誘導(dǎo)48h，產(chǎn)生M2巨噬細(xì)胞；
   
（2）RAW264.7細(xì)胞（小鼠單核巨噬細(xì)胞）
      RAW264.7細(xì)胞是主要炎癥模型、巨噬細(xì)胞極化等體外研究細(xì)胞，廣泛用于急性肺損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等模型中；LPS（200ng/ml），12h可以誘導(dǎo)此細(xì)胞向M1分化，產(chǎn)生炎癥因子，10ng/ml IL-4誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞12h可以產(chǎn)生M2細(xì)胞。