Edman 降解法：蛋白質(zhì)和小肽的N-末端氨基酸序列測(cè)定技術(shù)

Edman 降解法是一種用于確定小肽和蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸序列的方法。這種方法是基于周期性地移除肽鏈N-末端的氨基酸并檢測(cè)該氨基酸的身份。這個(gè)過程可以重復(fù)進(jìn)行，從而連續(xù)地確定多個(gè)氨基酸的順序。

Edman降解的大致步驟如下：

1.肽鍵選擇性標(biāo)記：

首先，樣品與Edman試劑（酚酞異硫氰酸）反應(yīng)，這會(huì)特異性地與肽的N-末端氨基酸形成一個(gè)環(huán)狀酞酰化衍生物。

2.酞�；�衍生物的裂解：

經(jīng)過酞酰化后，酞酰化氨基酸可以通過溫和的酸性條件（如三氟醋酸）從肽鏈上釋放出來，而不破壞肽鏈上的其它氨基酸。

3.氨基酸檢測(cè)：

釋放的酞酰化氨基酸可以通過色譜法進(jìn)行分離和檢測(cè)，從而確定其身份。

4.重復(fù)過程：

剩余的肽再次與Edman試劑反應(yīng)，釋放下一個(gè)N-末端的氨基酸，如此反復(fù)進(jìn)行。

圖1

雖然這個(gè)方法在確定小肽的序列上很有用，但它有一些局限性。其中最大的局限性是它在降解過程中會(huì)出現(xiàn)效率損失，這通常使得連續(xù)降解超過15-20個(gè)氨基酸變得困難。對(duì)于較大的蛋白質(zhì)，通常需要將其分解為較小的片段，然后對(duì)這些片段進(jìn)行Edman降解。

近年來，由于質(zhì)譜技術(shù)的進(jìn)步，質(zhì)譜成為了蛋白質(zhì)序列和鑒定的主要工具，但在某些情境下，Edman降解仍然是一個(gè)有用的補(bǔ)充方法。