ECO（BIOLOG Eco Board）生態(tài)板介紹及使用流程

ECO生態(tài)板介紹
微生物群落可以提供有用的信息對于研究應(yīng)用和基礎(chǔ)環(huán)境事件。
微生物存在于各種環(huán)境，對于環(huán)境中的化學(xué)和物理變化會首先做出反應(yīng)。因它們位于食物鏈底層，微生物群落的變化常是環(huán)境整體健康和活力變化的開端。
 
BIOLOG ECO平板特別為群落分析和微生態(tài)研究設(shè)計的，在一批微生態(tài)學(xué)家要求下設(shè)計的較之GN平板有較多碳源重復(fù)的生態(tài)分析板。
首先是1991年J. Garland and A. Mills.1利用BIOLOG 微平板分析群落。研究者發(fā)現(xiàn)通過接種混合菌群到GN板，培養(yǎng)一段時間后測量群體的指紋圖譜，可以確定微生物群落的特征。這種
群落層面的生理圖譜分析方法在辨別空間和時間層面微生物群落變化是很有效的。在應(yīng)用生態(tài)研究中，微平板既可以用來測試正常菌群的穩(wěn)定性，也可以測定引入各種外界因素作用后微生物群落發(fā)生的變化。
 
在環(huán)境科學(xué)的各種領(lǐng)域作的研究顯示，BIOLOG 微平板在這方面有很多的應(yīng)用。利用biolog微平板研究 群落變化已經(jīng)應(yīng)用于土壤，水，廢水，活性污泥，混合肥料和工業(yè)廢棄物領(lǐng)域。利用biolog 微平板分析微生物群落已發(fā)表超過500篇文章。
 
Ecoplate
Ecoplate 包含用于土壤群落分析最常用的31種碳源。這些碳源有3個平行，可以獲得更多的重復(fù)數(shù)據(jù)。微生物群落產(chǎn)生特征性的反應(yīng)稱作代謝指紋圖譜。從單個的微平板上的指紋圖譜就可以提供大量的信息。
 
微平板培養(yǎng)2-5天后對群落反應(yīng)圖譜進行分析，利用統(tǒng)計軟件比較分析圖譜的變化。常用PCA（主成分分析）軟件分析孔顏色產(chǎn)生均值（average well color development，AWCD ），但其他的統(tǒng)計方法也是可行的，或許也具有相應(yīng)的優(yōu)勢。2-7
圖譜的變化反應(yīng)了群落隨時間發(fā)生的變化。
 
BIOLOG 微平板分析技術(shù)在研究群落和生態(tài)變化方面與脂肪酸分析方法作了比較。微平板對環(huán)境變化更靈敏。同時也發(fā)現(xiàn)對于一些主要決定元素如溫度和水更敏感。
 
對GN和GN2 微平板也作了類似的分析。對一些研究來說，最好還是選擇ECO平板。但主要還是取決于自己的研究來決定哪種板適合群落 或生態(tài)分析。
 
步驟
1 環(huán)境樣品 以水溶液 或懸浮做成懸濁液后（土壤，污泥，沉積物等）直接加入平板。
2 微平板在自己設(shè)定的時間段培養(yǎng)和分析
3 用以下特征評價分析群落水平的生理圖譜：
圖譜生成（相似度）
每孔的顏色變化率
孔反應(yīng)的豐富度（多樣性）
 
當(dāng)細胞利用孔中的碳源進行呼吸代謝。群落中的細胞進行呼吸代謝會還原包含在碳源中的四唑紫染料。
反應(yīng)圖譜可以利用biolog 讀數(shù)儀來高效分析。也可以用普通酶標(biāo)儀來讀取590nm處的OD值。統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)常用其中的標(biāo)準軟件套裝。也有研究者發(fā)現(xiàn)使用PCA比其他軟件更好些。獲得更詳細的信息。
  
碳源共分成6大類：

• 碳水化合物類

B2，D-Xylose，D-木糖

• 聚合物類，

A2，ß-Methyl-D-Glucoside，ß-甲基D-葡萄糖苷  ， A3，D-Galactonic Acid y-Lactone，D-半乳糖內(nèi)酯

• 羧酸類

B1，Pyruvic Acid Methyl Ester，丙酮酸甲脂，B3，D-Galacturonic Acid，D-半乳糖醛酸

• 氨基酸類，

A4，L-Arginine，L-精氨酸，B4，L-Asparagine，L-天冬酰胺酸，E4，L-Threonine，L-蘇氨酸F4，Glycyl-L-Glutamic Acid，甘氨酰-L-谷氨酸

• 酚類 

• 胺類

G4，Phenylethyl-amine，苯乙基胺H4，Putrescine，腐胺，E2，N-Acetyl-D-Glucosamine，N-乙�；�-D-葡萄胺