如何選擇最佳的全血DNA、RNA提取方法？

 

從全血中提取DNA和RNA應該說是最基本的工作了，提取的DNA和RNA質量的好壞直接影響了下游的實驗和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇最適合的方法，成了很多人實驗開始前最難以抉擇的事情。我們從兩個方面，層層剝繭，分析最佳的實驗方法。

 

1、  全血的采集保存和DNA的提取

I.       用含抗凝劑的采血管進行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會影響下游的反應，如果沒有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年內均可以提取，保存時間越短，提取的質量越高，最好在2個月內提取。

II.       DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen、Promega、Bioteke；摒棄酚氯仿手提的方法，時間長毒性大），原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看，基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來說，離心柱（DP1801）的提取純度高一些，但是處理量小（0.1-1ml）、得率略低；溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說到國產和進口差別的時候，很多人以為進口一定比國產的好，我們覺得沒有最好，只有更好！在不斷的進行試驗優(yōu)化之后，全血基因組DNA提取試劑盒DP2101或DP2201開創(chuàng)了第三代技術，不需要蛋白酶K消化，進口的都是要借助蛋白酶K的�。�DP2101或DP2201減少了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時間，而且提取量和穩(wěn)定性更好。

III.     非抗凝血（凝固血）能否提��？答案是肯定的，而且一點都不麻煩，提取效果和抗凝血沒有差別！在你找遍了進口的所有品牌都找不到后，回過頭來您才發(fā)現(xiàn)原來他就在身邊，百泰克的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經有很多忠實的用戶。

2、  全血RNA如何提取

I.       全血RNA提取過程哪些是RNA降解的因素？

全血中RNA酶是非常豐富的，RNA在沒有保護的狀態(tài)下很容易降解！哪些是狀態(tài)RNA不受保護呢，比如紅細胞裂解液裂解紅細胞的過程，紅細胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液，沒有抑制RNase的成份，這時候RNA不受保護；DNA酶消化的時候RNA也不受保護，這個時候也沒有抑制RNase的成份。

II.    什么樣的提取方法更好？

我們在選擇方法的時候要傾向于對RNA全程有保護的方法！一般的方法都是先用紅細胞裂解液裂解紅細胞，然后從白細胞提取核酸，還要經過DNA酶的消化去除DNA，這種并不是最好的方法，過程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最好的方法，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液RLS——RP4001血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液，迅速顛倒混勻。裂解液RLS含有強烈的蛋白變性劑，能迅速變性蛋白，是RNase變性，不能對RNA降解。裂解后的混合液還可以用來運輸，以避免RNA降解，這個方法成為博奧生物制作表達譜芯片RNA運輸和提取的推薦方法

環(huán)境微生物DNA提取方法的突破

農藥、除草劑、各種污染物、人工合成物等異生物質，對環(huán)境和土壤微生物的多樣性、種群變化產生明顯影響；轉基因作物是否發(fā)生土壤基因轉移的檢測，轉基因作物的安全性評價等

方面的研究，都需要準確的提取高質量的DNA進行檢測！

 

土壤中可培養(yǎng)的微生物可能不及所有微生物總數(shù)的0.3%，常規(guī)提取DNA的方法很難提取到DNA，很難把土壤中的腐殖酸去除干凈，而微量的腐殖酸就可能導致PCR失敗。

 

目前國際上商用的試劑盒雖然能提取到土壤中微生物的DNA，但由于破碎方法采用玻璃珠或者鋼珠破碎，導致基因組斷裂嚴重，影響DNA質量；第二，由于必須購買破碎專用的破碎機或振蕩器，增加其使用成本；第三，其試劑盒為了保證DNA純度，采用了包括玻璃奶、離心吸附柱串聯(lián)的純化方式，導致了DNA大量的損失，得率很低，很難真正反映出土壤中微生物的多樣性。

百克推出的土壤基因組DNA快速提取試劑盒（DP4001）采用創(chuàng)新技術，摒棄了機械破碎細胞的方法，采用酶法破碎，保證了基因組的完整性，摒棄了玻璃奶、離心吸附柱串聯(lián)純化DNA的方式，極大的提高了DNA的得率，幾乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出來，能真正反映土壤中微生物的多樣性！

 

 

產品名	基因組裂解方法	純化得率	實驗設備
BioTeke Soil Genomic DNA Rapid Extraction Kit	酶法破碎基因組完整	特制純化柱得率純度高	時間1小時內不需要特殊設備
FastDNA® SPIN Kit	鋼珠破碎基因組斷裂	玻璃奶離心吸附柱純化得率低	時間2小時需要專門破碎設備
UltraClean™ Soil DNA Isolation Ki t	玻璃珠破碎基因組斷裂	離心吸附柱純化得率低	時間2小時需要專門震蕩器

玻璃奶純化得率60-75% ，離心吸附柱純化得率60-80% ，百泰克的產品因為不使用玻璃奶和離心吸附柱純化,直接用異丙醇沉淀,能極大的避免DNA的損失!