動(dòng)物胸腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

正常動(dòng)物胸腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 胸腺上皮細(xì)胞來(lái)源；一般取材小鼠或手術(shù)切取的兒童之胸腺；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 有血清培養(yǎng)液：可使用RPMI1640培養(yǎng)液，添加10%胎牛血清、谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸鈉1mmol/L、非必需氨基酸1mmol/L、2-巰基乙醇（2-ME）5×10^-5 mol/L、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml（Schreiber et al.1991）。也可以DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

4. 化學(xué)限定性培養(yǎng)液：基礎(chǔ)培養(yǎng)液為DMEM，添加HDL100μg/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白50μg/ml、胰島素5μg/ml、氫化可的松2.7×10^-7 mol/L、EGF 10ng/ml、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸（T3）1×10-¹⁰mol/L（Schreiber et al.1991）；

5. 消化液：原代培養(yǎng)時(shí)，從胸腺組織制備細(xì)胞懸液時(shí)，所用的消化液為1mg/ml的膠原酶，用含有15%胎牛血清的DMEM配制。傳代時(shí)所用的消化液為0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶混合液；

6. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷，止血鉗，無(wú)菌消毒手術(shù)器械；

7. 離心管（15ml、50ml）

胸腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)最大的問(wèn)題是成纖維細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng)，故抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的成功的關(guān)鍵。