原代貼壁細(xì)胞吉姆薩染色法

原代貼壁細(xì)胞吉姆薩染色法

染液制備：

1. 稱取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油；

2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內(nèi)充分混合，研磨至無(wú)顆粒；

3. 將剩余的甘油倒入研缽，于56℃保溫2h；

4. 加入33ml純甲醇混勻，即為吉姆薩母液，將其保存于棕色試劑瓶?jī)?nèi)；

5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液；

貼壁細(xì)胞染色步驟：

1. 去除培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)液，用平衡鹽溶液反復(fù)漂洗單層培養(yǎng)物2次；

2. 加入平衡鹽溶液，再逐滴加入等體積甲醇，邊加邊混合，靜置10min；

3. 將50%甲醇-BSS混合液丟棄，加入新鮮的甲醇液浸泡固定細(xì)胞10min，然后用甲醇漂洗細(xì)胞1次；

4. 將瓶?jī)?nèi)細(xì)胞干燥后儲(chǔ)存或直接染色；

5. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆薩染液，覆蓋細(xì)胞層，染色2min；

6. 移除染液，用自來(lái)水沖洗掉粉紅色背景后，再用去離子水沖洗細(xì)胞；

7. 用顯微鏡觀察單層潮濕細(xì)胞。若細(xì)胞已干，可重新使細(xì)胞潮濕后再觀察；

結(jié)果：

細(xì)胞核被染成紫紅色或紫藍(lán)色，而細(xì)胞質(zhì)則被染成淺紅色；

吉姆薩染色法注意事項(xiàng)：

1. 染液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，舊染液染色效果不佳。染液保存時(shí)間不宜超過(guò)48h；

2. 吉姆薩對(duì)pH極敏感，因此，緩沖液pH要準(zhǔn)確，否則染色效果不佳。如用染色缸染色時(shí)，隨染色時(shí)間的延長(zhǎng)，在染液表面常形成一層氧化膜（發(fā)亮）易附著在玻片上形成污穢，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是現(xiàn)配者時(shí)，染色前應(yīng)先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進(jìn)行染色。染色完畢，應(yīng)把標(biāo)本浸入水中漂洗染液；