原代細胞甲基綠-哌咯寧法顯示DNA和RNA

 

基本原理：

甲基綠（methyl green）和哌咯寧（pyronin）均為堿性染料，因此可與帶負電荷的磷酸根形成鹽。甲基綠分子有2個正電荷，易與雙鏈DNA分子結(jié)合使原代細胞核內(nèi)的DNA呈藍綠色。哌咯寧分子有一個正電荷，易與單鏈RNA分子結(jié)合使原代細胞質(zhì)和核仁內(nèi)的RNA顯示紅色。也有人認為染色原理與核酸分子的空間構(gòu)型有關(guān)。

 

配制試劑：

1.       0.2mol/L pH4.8的乙酸緩沖液的配制

將1.2ml冰乙酸加蒸餾水定容至100ml，在使用時再加2.72g乙酸鈉（NaAc·3H2O），待完全溶解后，即可使用；

2.       甲基綠-哌咯寧染色液配制

A液：取2g甲基綠加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可；

B液：取1g哌咯寧加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可；

用時將A、B液按5：2混合即可；

 

染色步驟：

1.       取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細胞，用Hanks液漂洗三次；

2.       70%乙醇溶液固定10min，取出后晾干；

3.       滴加甲基綠-哌咯寧染色液覆蓋蓋片樣品，染色15min；

4.       蒸餾水沖洗3次；

5.       95%乙醇分色，晾干；

6.       用二甲苯透明，用光學樹膠封片后觀察；

 

結(jié)果：

原代細胞核因含DNA呈綠色，細胞質(zhì)及核仁因含RNA呈紅色；