原代細(xì)胞骨架的染色方法

 

微絲的顯示方法步驟：

1.    用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細(xì)胞3次，每次30s；

2.    用2%的甲醛/PBS液固定原代細(xì)胞3min；

3.    用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次，每次10min；

4.    PBS漂洗3次；

5.    用羅丹明（rhodamine）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（phalloidin）（1：10）室溫中反應(yīng)15min；

6.    PBS漂洗3次；

7.    60%甘油+熒光防淬劑封片；

8.    熒光顯微鏡觀察；

 

微管的顯示方法：

1.    用PBS液漂洗蓋玻片的原代細(xì)胞3次，每次30s；

2.    在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min；

3.    用PBS液再漂洗3次，每次1min，最后用濾紙吸干多余的PBS液；

4.    投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；

5.    用PBS漂洗3次，每次1min，最后用濾紙吸干多余的PBS液；

6.    向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級(jí)抗微管蛋白抗體，令小蓋片細(xì)胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，于37℃溫箱中放置45min—1h；

7.    向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子夾出，按步驟3處理；

8.    向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標(biāo)記的二抗，其后操作按步驟6進(jìn)行；

9.    按步驟7和3操作；

10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上，把小蓋片的原代細(xì)胞面覆在大蓋片上；

11.將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察；