FITC標(biāo)記抗體-Chadwick氏法

試劑：

抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞；

 

材料：

離心機(jī)及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無(wú)菌吸管及毛細(xì)滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等；

 

方法與步驟：

1.       抗體的準(zhǔn)備。用0—4℃ pH8.0的PBS將免疫球蛋白溶液濃度稀釋為30—40mg/ml，置于三角燒瓶?jī)?nèi)，放入冰槽中；

2.       熒光素的準(zhǔn)備。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg熒光素計(jì)算，稱取所需的熒光素量，用3%重碳酸鈉水溶液溶解；

3.       將上述已準(zhǔn)備好的抗體與熒光色素溶液等量混合，充分?jǐn)嚢�，使其�?—4℃冰箱中結(jié)合18—24h；

4.       透析。熒光素與球蛋白結(jié)合完畢后，將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min，除去其中少量的沉淀物后，裝入透析袋中再置于燒杯中，在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析過夜；

5.       過柱。取透析過夜的標(biāo)記物，過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱，分離出游離熒光素，收集標(biāo)記的熒光抗體進(jìn)行鑒定；