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新一代Fluidigm 微流體芯片PCR技術(shù)在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):4811 發(fā)布日期:2011-6-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

通過對單核苷酸多態(tài)性(SNP)的篩查,對育種分類,鑒定,改良,及進(jìn)行動植物管理, 為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)帶來巨大改變。但采用有關(guān)方法前, 需要對物種進(jìn)行大規(guī)模的篩選研究。市場上Affymetrix公司提供的芯片可掃描500,000到900,000個SNPs位點(diǎn)而Illumina公司 的BeadChips可掃描300,000到2,500,000 個SNPs位點(diǎn)等,但此等芯片,在高通量樣本下成本將變得非常昂貴。遺傳學(xué)家需要一個高通量,高精確度但成本劃算的篩查方法 -Fluidigm公司的微流體芯片應(yīng)用PCR 原理,進(jìn)行于鑒別基因變異——單核苷酸多態(tài)性(SNP)篩查, 特別適合SNPs位點(diǎn)(約50-300)的快速的大規(guī)模樣本(樣本量達(dá)數(shù)千以上)的篩選。
我所欲也
美國阿拉斯加漁業(yè)局研究主管Jim Seeb和他的妻子Lisa 在大約20年前就采用SNPs作為遺傳標(biāo)記來鑒定三文魚群體并以此管理捕撈業(yè)。在2008年1年中,阿拉斯加基因?qū)嶒?yàn)室采用Applied Biosystem的384孔PCR系統(tǒng)對大約30,000條三文魚進(jìn)行基因分型。如能對45個SNPs位點(diǎn)進(jìn)行鑒定,但也產(chǎn)生1,350,000個數(shù)據(jù)點(diǎn) (45x30,000), 如使用傳統(tǒng)384孔板及單通道PCR, 45塊384孔板只能處理384個樣本,所有樣本需要 78x45塊共3516塊板和大量試劑!但當(dāng)他們發(fā)現(xiàn)了 Fluidigm 公司的BioMark 系統(tǒng)后,他們可一次檢測96個SNP點(diǎn),將實(shí)驗(yàn)質(zhì)量大大提升,使用極小量試劑和一塊BioMark Dynamic Array可一次同時分析96個不同樣本的96個SNPs位點(diǎn)(9216個數(shù)據(jù))!斑@是一種更簡易和更少出錯的工作流程”Seeb說,F(xiàn)在,該實(shí)驗(yàn)室每天在9臺Fluidigm的PCR儀上進(jìn)行16塊芯片的實(shí)驗(yàn),每周4天,并計劃在2011年對200,000條三文魚進(jìn)行基因分型!皼]有此項技術(shù),我們根本無法完成這樣的任務(wù)”漁業(yè)局首席遺傳學(xué)專家Bill Templin說。
- 我所欲也,魚與牛皆可得也!
2009年的春天, 美國農(nóng)業(yè)部的一位遺傳學(xué)專家Curt Van Tassell正在尋找一種方法來對世界上每一頭奶牛進(jìn)行基因分型。在過去的10年中,Curt已經(jīng)研究了數(shù)百頭重要的奶牛的SNPs,希望找出其對生長速度、產(chǎn)奶產(chǎn)量、奶牛健康、壽命等關(guān)系。Curt與美國Illumina公司合作在2007年研發(fā)出一種有54,000個SNPs位點(diǎn)的3μm微球芯片,并很快應(yīng)用該技術(shù)于奶牛公牛的篩選。然而,采用該項技術(shù),每頭公牛的鑒定成本大約需要150-200美元,須然如此昂貴,但很多的公牛也會接受分子育種檢測, 幫助農(nóng)民估計公牛的價值。為了要把技術(shù)推廣到每一頭奶牛、每個小規(guī)模農(nóng)場甚至是非洲等第三世界國家,該費(fèi)用還需要大大降低。于是,在2009年春天,當(dāng)Curt 從一家三文魚公司和種子基因分型公司那里知道Fluidigm公司基因分型平臺后,馬上接觸Fluidigm公司。然而,Curt要求的是一個足夠便宜的工具能用于類似非洲等世界上最窮的農(nóng)場, 成本需要比Fluidigm公司已有平臺更低才可以!為了達(dá)到把成本下降到“現(xiàn)在每個數(shù)據(jù)成本的1/3到1/5”,F(xiàn)luidigm 公司經(jīng)過將近1年的努力,終于在2010年7月初,推出世界上第一個可重復(fù)使用的微流體芯片。使用可重復(fù)使用的芯片,每個數(shù)據(jù)點(diǎn)的花費(fèi)大約為<0.02美元。離Fluidigm公司的目標(biāo)1便士1個數(shù)據(jù)點(diǎn)的愿望,或許在第二代可重復(fù)使用芯片誕生時即可實(shí)現(xiàn)。
種子農(nóng)友的成功基礎(chǔ)!
全球首屈一指的農(nóng)用優(yōu)質(zhì)蔬菜種子供應(yīng)商Enza Zaden公司選用Fluidigm的BioMark™系統(tǒng)和新款96.96動態(tài)陣列(Dynamic Array)來確保其種子供應(yīng)的質(zhì)量。在全球糧食供應(yīng)方面,對高產(chǎn)和抗病作物的需求越來越大,因此,市場仍然迫切需要各類優(yōu)質(zhì)種子,用來種植味美又營養(yǎng)的蔬菜。不同的土壤特性和氣候帶會影響作物的生長,我們的地球不再是同一類種子能滿足每個人需求的地方了。面對這樣的情況,Enza Zaden公司采用基于遺傳的標(biāo)記物輔助篩選技術(shù)來選種,并對幾十萬的種子進(jìn)行檢查,以確保能長出恰好符合人們口味的作物產(chǎn)品,并對合適的品種進(jìn)行育種,滿足每個人的需求。
人類與疾病?
自人類基因組計劃在2001年發(fā)布后,科學(xué)家們嘗試通過GWAS研究將SNPs與人類特征與疾病關(guān)聯(lián)起來。盡管花費(fèi)了大量的經(jīng)費(fèi)和時間,然而很多的GWAS研究并不能很好揭示它們之間有緊密的聯(lián)系。因此,科學(xué)家急切需要一種工具去驗(yàn)證某種疾病與SNPs的關(guān)聯(lián),需要的是一種能快速驗(yàn)證及重復(fù)性良好的工具。“如果你正在做大規(guī)模的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),你需要最便宜、高質(zhì)量的結(jié)果”,牛津大學(xué)維康信托基金會人類遺傳中心 (Wellcome Trust Centre for Human Genetics at the University of Oxford) 基因組首席基因組學(xué)專家Jiannis Ragoussis說。一些研究機(jī)構(gòu)已經(jīng)開始使用Fluidigm的芯片進(jìn)行該項研究,包括美國國家癌癥研究所(NCI),他們在進(jìn)行60個SNP位點(diǎn)、15,000個樣本的前列腺癌GWAS后續(xù)研究。“該芯片或許能夠在更廣闊的領(lǐng)域發(fā)揮其作用”,Ragoussis補(bǔ)充道。如果研究者們證明了近百個SNP位點(diǎn),如50-100個,可以為醫(yī)生提供有用的信息,那么,也許有一天,將會有癌癥芯片、糖尿病芯片、心臟病芯片……
 
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來源:廣州進(jìn)科馳安科技有限公司
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