總GLP-1酶免試劑盒使用說明書

【預期用途】

該高靈敏度ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）試劑盒是專門用來定量檢測血漿樣本中的胰高血糖素樣肽-1（7-36）[GLP-1（1-36）]和（9-36）[GLP-1(9-36)]的總濃度。哺乳動物的GLP-1肽鏈的基本氨基酸序列完全相同，如：小鼠、大鼠、豬、狗、猴、人等。該試劑盒僅適用于科學研究。

【實驗原理】

該ELISA的設(shè)計，研發(fā)和生產(chǎn)的目的是對血清樣品中的活性GLP-1（7-36）和GLP-1(9-36)進行定量檢測。它是基于運用兩個GLP-1特異性抗體與兩個位點結(jié)合的“雙位點夾心”技術(shù)。

將標準品、質(zhì)控品、和待測樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，將生物素偶聯(lián)的GLP-1特異抗體和HRP標記的GLP-1特異抗體混合物添加到各個孔中。經(jīng)過第一個保溫孵育期，形成了“鏈霉親和素-生物素抗體- GLP-1（7-36）/(9-36)-HRP標記抗體”的“雙位點夾心”結(jié)構(gòu)，該復合體被微孔板的內(nèi)壁吸附住。游離的HRP標記抗體和緩沖基質(zhì)則在洗滌過程中被沖走。微孔板加入過氧化物酶基質(zhì)（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，TMB）并經(jīng)過一段時間的反應后，然后用酶標儀測量吸光度。微孔板內(nèi)壁的免疫復合體與GLP-1（7-36）/(9-36)的連接酶活性與樣本中的總GLP-1數(shù)量成正比。

簡要實驗步驟

• 在各指定孔中分別添加100µL標準品、質(zhì)控品和病人樣本；
• 在各孔中添加100µL抗體混合物；
• 2-8℃靜置培養(yǎng)20-24小時；
• 用洗滌緩沖液稀釋液洗凈條帶；
• 在各孔中添加200 µL的TMB基質(zhì)；
• 室溫下靜置20分鐘；
• 添加50 µL終止液；
• 讀取450nm/620nm和450nm/650nm下的吸光度。