強(qiáng)致癌物質(zhì)黃曲霉毒素M1檢測方案

  針對近日來國家質(zhì)檢總局公布了的蒙牛乳業(yè)（眉山）和福建長富純牛奶抽查的產(chǎn)品被檢出黃曲霉毒素M1超標(biāo)的問題。蒙牛乳業(yè)對此向民眾進(jìn)行了致歉申明，反應(yīng)了民族企業(yè)的責(zé)任心和對食品安全的重視。對于黃曲霉毒素M1的限量，在之前的相關(guān)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中有明確規(guī)定，其中：鮮乳及其乳制品（折算為鮮乳汁）不得超過0.5ug/kg;嬰兒代乳食品不得檢出黃曲霉毒素b1。（GB 2761-2005國家標(biāo)準(zhǔn)—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003國家標(biāo)準(zhǔn)—乳及乳制品中黃曲霉毒素M1限量！

黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅(jiān)果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液，動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。霉菌的生長并不一定表明黃曲毒素的存在，因?yàn)辄S曲毒素只有在濕度、溫度適合及通風(fēng)良好才會生成。黃曲霉素B類具有藍(lán)色熒光，G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2)，還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉素M，其中毒性最高的M的代謝物為4－羥基化的產(chǎn)物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。其危害巨大，人類日常消費(fèi)食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其實(shí)主要是指黃曲霉毒素比砒霜毒。

目前來講，Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，酶聯(lián)免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。

作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商， 2010年泰樂祺科技投巨資成立了"檢測應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室"，重點(diǎn)關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術(shù)問題，以期望快速提出解決方案。近期應(yīng)針對奶中出現(xiàn)的黃曲霉毒素M1超標(biāo)問題，泰樂祺科技提供了兩種檢測方案，可以幫助企業(yè)輕松應(yīng)對奶中黃曲霉毒素M1的限量檢測。

 

根據(jù)國標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定

　實(shí)驗(yàn)用前處理：

實(shí)驗(yàn)儀器和好耗材包括：

恒溫水浴鍋　溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml  高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī)  定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管

　　實(shí)驗(yàn)用試劑：色譜乙腈色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等

HPLC條件：

 

樣品取樣：真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。

樣品前處理：分不同樣品

牛奶  水浴加熱至40度，離心用上清液過柱凈化；

乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，高速均質(zhì)器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

干酪：稱取適量切細(xì)或粉碎，過篩用加純水溶解，高速均質(zhì)器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取，然后用適宜的有機(jī)溶液萃取，取若干上清液過柱凈化

奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后分頁漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過柱凈化。

免疫柱凈化步驟：完全符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。

┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。

注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。

HPLC 檢測需要儀器與耗材

酶聯(lián)免疫檢測法：符合國家標(biāo)準(zhǔn)

酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

牛奶 直接離心取上清液用于檢測

奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，離心取上清液用于檢測

試劑盒檢測時(shí)間：30分鐘＋30分鐘

交叉反應(yīng)率：

 

　　分析人員要求：

化學(xué)分析儀器及其相關(guān)專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經(jīng)驗(yàn)的人員。

 

注：作為面向全球提供霉菌毒素檢測技術(shù)解決方案的主要服務(wù)商之一，PriboLab憑借強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和霉菌毒素檢測技術(shù)的研究，為全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專業(yè)的真菌毒素檢測技術(shù)產(chǎn)品與技術(shù)服務(wù)。北京泰樂祺作為 PriboLab在中國的唯一合作伙伴，積極為國內(nèi)客戶提供優(yōu)質(zhì)的霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)，為國內(nèi)客戶提供適宜的霉菌毒素檢測方案，幫助國內(nèi)客戶建立高效優(yōu)質(zhì)的霉菌毒素項(xiàng)目檢測平臺。